抗体纯化

 

什么是抗体纯化？

多克隆抗体、单克隆抗体 (mAb) 和抗体片段通常通过亲和层析纯化。含螯合配基（例如蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 L）的填料可用于捕获抗体和抗体片段。

亲和纯化具有高选择性。通常只需一步即可达到 95% 以上的纯度。但许多抗体应用仍需进一步纯化。在精纯步骤中，通常选择尺寸排阻层析法从聚集体中分离单体。

抗体纯化原理是什么？

抗体亲和层析基于蛋白 A 和蛋白 G 对许多物种 IgG 的 Fc 区的高亲和力和特异性。与 κ 轻链结合的蛋白 L 是另一种配基，可用于从多种真核生物物种中纯化抗体片段、IgG 和其他抗体。

抗体与配基的结合具有可逆性，抗体通常通过降低 pH 值进行洗脱。

 

 

何时应进行抗体纯化？

亲和层析可用于从细胞培养上清液和血清中纯化抗体。如果抗体片段包含与附着在基质上的配基相互作用的区域，则可进行纯化。scFv、Fab 和 dAb 均可通过亲和层析进行纯化。

对于不需要最高纯度的应用，亲和层析可作为唯一的纯化步骤。根据预期用途，可能需要额外的纯化步骤。

 

手册

• 抗体纯化 (pdf)

其他资源

• 应用说明：使用 ÄKTA start 和 HiTrap Protein G HP 柱纯化抗体 (pdf)
• 手册：抗体片段捕获工具 (pdf)