Western 印迹中转印方法的比较
凝胶电泳后，将蛋白质从凝胶转印到膜上开始 Western 印迹。电转印是一种常见的阶跃技术，利用与凝胶电泳相同的电迁移原理。
湿式转印和半干式转印是两种最常见的电转印方法，与基于扩散、毛细作用和真空的其他方法相比，速度更快、效率更高。
什么是湿式转印？
湿式转印通常适用于所有蛋白质，使用将泡沫垫、滤纸、凝胶和膜夹在一起的转印盒。将转印盒浸没在转印缓冲液中，并将膜置于阳极侧（图 1），以确保蛋白质朝正确的方向移动。
电泳过程中，带负电荷的蛋白质从凝胶向阳极迁移，与膜接触并结合。转印速度从 1 小时到一夜不等，通常在恒定电压下进行，以保持场强并最大限度提高转印效率。
恒定电压下的较长转印时间会导致不必要的发热、电阻减小和电流增加。通常需要采取适当的冷却措施（包括冷却缓冲液、冰袋，以及在 4 °C 的冷室中进行转印），以防止缓冲液分解。一些湿式转印系统采用集成冷却。
图 1.湿式转印夹层组装完毕（上图），放入盒中，浸没在装有缓冲液的转印槽中，膜最靠近阳极（下图）。
什么是半干式转印？
半干式转印遵循与湿式转印相同的原理，但速度更快，使用的缓冲液体积更小。
凝胶和膜夹在浸泡在转印缓冲液中的滤纸之间，两侧有电极板（图 2）。与式湿转印一样，当施加电场时，蛋白质会从凝胶中向阳极移动，并与膜结合。
与湿式转印不同的是，半干式转印使用的缓冲液极少，所需时间也从几小时缩短到几分钟。电极板在短暂运行时间内吸收热量，因此需要采取更少的冷却措施。但是，半干式转印总体效率较低，明显影响大分子量蛋白质的转印。
图 2.半干式转印装置中凝胶膜夹层的构建与湿式转印相似。所有组件都浸泡在转印缓冲液中，与电极直接接触，压缩夹层。
无论是湿式转印还是半干式转印后，都可以根据需要对膜进行染色或免疫印迹。
这些方法有哪些优点/缺点？
表 1 总结了湿式转印和半干式转印之间的主要区别。
表 1. 蛋白质湿式和半干式转印的比较
| 优点 | 缺点 | |
| 湿式转印 | 高效转印小蛋白和大蛋白 | 需要足够的冷却措施 |
| 膜上有清晰锐利的条带 | 大量缓冲液 | |
| 特别适合转印大分子蛋白质 | 运行时间从 1 小时到整夜 | |
| 半干式转印 | 运行时间短 (<1 h) | 总体转印效率低于湿式转印 |
| 需要缓冲液量小 | 不适合大蛋白 | |
| 高效转印小蛋白 (Mr 20 000)，尤其是使用聚偏氟乙烯 (PVDF) 膜时 | 膜上容易产生不清晰的条带 |
我应该选择哪种方法？
蛋白质大小是选择转印方法的一项重要因素。大蛋白的固有迁移速度较慢，可能导致半干式法的转印效率较低。但是，半干式转印的速度使其对于需要快速检查蛋白质存在与否的实验来说十分方便。
相反，对于相对分子质量 (Mr) 大于 80 000 或需要定量分析的蛋白质，湿式转印时间较长，是更合适的选择。图 3 着重说明了人转铁蛋白 (Mr 80 000) 湿式转印和半干式转印之间的效率差异。
图 3. 转铁蛋白两倍稀释系列（从左到右的条带），从 5 µg 开始，通过湿法（左）和半干法（右）转印到 PVDF 膜上。半干式转印 半干式转印对于这种特定蛋白质的效率低于湿式转印；在整个稀释系列中转印的蛋白质较少，导致灵敏度降低。
欲了解更多信息，请下载 Western 印迹手册。