凝胶过滤柱

尺寸排阻层析

尺寸排阻层析 (SEC)，又被称为凝胶过滤层析，可基于分子的形状、粒径或分子量进行分离。该技术被用于纯化多种生物分子和颗粒，包括蛋白、蛋白复合物和病毒。

尺寸排阻层析不需要结合洗脱方案。这是一种最温和的纯化方式，能保留目标分子的生物活性。由于目标分子不与层析填料结合，缓冲液组分对该层析的分辨率没有直接影响。因此，研究人员和生物工艺开发人员能通过改变实验条件使其适用于不同类型的样品。

尺寸排阻层析的工作原理

凝胶过滤填料是一种由球状颗粒组成的多孔基质，具有较低的反应性和吸附能力。将样品加入尺寸排阻层析柱时，比孔隙大的分子无法进入基质中。因此，这些分子最早离开层析柱，或称为洗脱。基于生物分子的大小，中等大小的分子进入孔隙的程度各不相同。

如果一个分子小于基质上的最小孔径，那它就会进入所有的孔内体积，最后才被洗脱出来。SEC 填料设计有分离范围，列出了可通过孔隙的分子量范围。分离范围较小的填料非常适合分离小生物分子，例如肽类，而分离范围较大的填料则支持分离蛋白大分子，如抗体等。填料的排阻极限表示在外水体积中被洗脱的分子大小。

对于高分辨率蛋白纯化，需要考虑以下因素：

• 粒径
• 层析柱尺寸
• 系统体积
• 流速
• 层析柱装填效果

填料的选择性取决于层析条件、填料特性以及样品和填料之间的相互作用。

尺寸排阻层析柱常见问题解答

以下是有关尺寸排阻层析柱的一些常见问题及解答。

如何选择尺寸排阻层析柱？

我们针对预装尺寸排阻层析柱给出了推荐运行条件，以获得最佳效果。请选择填料分离范围合适的层析柱，以实现高分辨率分离。用于制备级分离的尺寸排阻层析柱的柱床高度应为 30 至 100 cm。此外，根据需要处理的样本量选择层析柱大小。您可以使用 Cytiva Purify 应用程序，以帮助您选择我们的 SEC 层析柱和填料。

什么是尺寸排阻层析的分辨率？

分辨率是指在层析分离中，保留时间不同的两个峰之间的分离程度。

哪些分子最早离开尺寸排阻层析柱？

在凝胶过滤层析的分离过程中，较大的生物分子首先离开层析柱。尺寸较小的分子可进入的孔隙较多，因此在层析柱中停留的时间更长。