Western 免疫印迹检测

什么是 Western 印迹？

Western 印迹是一种使用抗体鉴定细胞裂解物样本中目的蛋白的研究方法。印迹是检测和定量蛋白和核酸的最常用分析方法之一。

Western 印迹利用三个要素实现分离：

• 分子大小或分子量
• 蛋白转印至固相载体
• 使用抗体标记目的蛋白。

Western 印迹方案通常需要通过 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 分离蛋白，然后转印至聚偏二氟乙烯 (PVDF) 或硝酸纤维素膜。蛋白被转印至固相载体后，即会对其进行染色，以便于可视化并通过质谱或免疫检测进行鉴定。其中每个步骤使用不同的 Western 印迹材料。

在 Western 印迹免疫检测过程中，通过目的蛋白与特异性抗体结合来鉴定目的蛋白。一抗结合 HRP 或 AP 偶联二抗可进行比色检测。

Western 印迹的应用

研究人员和生物制造商将 Western 印迹用于以下用途：

• 检测是否存在特异性蛋白
• 确定翻译后修饰的程度
• 确认克隆中的蛋白表达
• 分析蛋白和生物标志物表达
• 抗体表位图分析

使用合适的 Western 印迹材料和方案可确保您的印迹技术具有高检测灵敏度和速度。

Western 印迹材料

以下是 Western 印迹方案的常用材料：

• 硝酸纤维素或 PVDF 转印膜
• 转印缓冲液
• 洗涤缓冲液
• 封闭缓冲液
• 孵育托盘和容器
• 一抗
• 二抗
• HRP 化学发光底物

Western 印迹材料常见问题解答

以下是关于 Western 印迹材料的一些常见问题的回答：

Western 印迹使用哪些试剂？
Western 印迹方案使用的试剂包括：

• PAGE 缓冲液
• 蛋白标志物
• 印迹膜
• 蛋白凝胶染色试剂盒
• 封闭缓冲液
• ECL 底物
• Western 印迹成像仪

Western 印迹中使用什么滤纸？
Western 印迹使用 Western 印迹滤纸和垫片进行高效的蛋白转印。这种棉纤维素滤纸支持用于其他印迹应用，如 Northern 和 Southern 印迹技术。

Western 印迹中使用哪些类型的膜？
Western 印迹膜主要有 PVDF 和硝酸纤维素膜两种类型。这种膜的特点是具有高结合载量、表面积与体积比大并且延长了分子的存储。这些膜易于使用，具有不同的孔径。

• 硝酸纤维素膜：由于硝化纤维素膜具有非常高的蛋白结合亲和力 (80-100 g/cm2)，因而是 Western 印迹的常见选择。这些膜可以固定多种蛋白，并与多种检测方法兼容。疏水相互作用是最常见的蛋白固定方法。蛋白固定可在高盐浓度和低甲醇浓度下通过电泳转印进行增强。这种膜的特征是结合效率高且具有不可逆性。
• PVDF 膜：由于 PVDF 转印膜具有非常高的疏水性，因而核酸和蛋白更容易固定在上面。这种膜需要先用乙醇或甲醇浸泡，然后将其置于转印溶液中。PVDF 比硝酸纤维素膜更耐用，可多次重复使用。