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细胞转染

细胞转染是通过非病毒技术将 DNA、RNA 等核酸导入真核细胞来产生转基因细胞的过程。通过修改中细胞的遗传物质,可以有效地研究细胞的生物过程和基因功能。

影响转染效率的一些因素

  1. 细胞健康状况。为了优化培养过程,应确保使用适合特定细胞系的培养基来培养细胞。您的细胞是否含有微生物或支原体等污染物?如果有,应丢弃,然后使用未受污染的原液重新培养。还可以根据需要在转染培养基中补充生长因子或其他添加剂来提高活力。如果您使用血清,务必要考虑可能对转染效率造成的影响。
  2. 融合度。影响转染的另一个重要因素是融合度。融合度是指细胞在培养容器表面(例如组织培养瓶)上的覆盖面积。细胞应保持积极分裂且健康才能获得最佳结果。融合度的目标值以 50%-80% 为宜。
  3. DNA 数量和质量。可实现有效转染的最佳 DNA 量因 DNA 类型、转染培养基、细胞数量和细胞类型等因素而异。转染过程中使用的质粒 DNA 应最大限度去除 RNA、蛋白质和污染物。

如何提高细胞转染效率
转染效率很大程度上取决于细胞的类型和细胞培养容器中的条件。下面是一些提高效率的方法:

  • 如果使用脂质体作为转染试剂,则优化脂质体与 DNA 的比例:确保转染培养基中阳离子脂质成分的正电荷等于或大于 DNA 的负电荷。
  • 调节 DNA 含量:通过实验确定 DNA 和试剂浓度的范围以获得峰值效率。
  • 跟踪转染时间:评估不同的转染时间,找出对您的细胞系来说效率最高的转染时间。
  • 考虑是否可去除血清:由于血清可能会干扰转染,应选择无血清转染培养基以获得最佳结果。

转染常见问题解答

下面是有关转染的一些常见问题及解答。

转染分为哪两种类型?
根据对细胞的长期影响,转染技术分为两大类:瞬时转染和稳定转染。在瞬时转染中,外源 DNA 不会整合到宿主细胞的染色体中。相反,稳定转染会将目的 DNA 整合到宿主基因组中。因此,这些细胞的后代也能够表达新的基因。

转染有何用途?
转染的工业用途包括将 DNA 或 RNA 序列递送到细胞中进行生物制造。该过程也将基因引入病毒载体,例如慢病毒腺相关病毒 (AAV),用于重组疫苗生产以及细胞和基因疗法