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冷冻保存

深低温保藏是指将细胞冷却到细胞内活动停止的程度。如操作得当,深低温保藏会在最大限度减少损伤的情况下冷冻细胞,因此在后续储存和复苏后细胞仍保持较高活力。冷冻细胞还可以限制污染并减少遗传改变。在细胞冷冻过程中添加冷冻保护剂,以最大限度地减少冰晶和渗透压变化(在无冷冻保护剂的情况下会出现)对细胞的损伤。

细胞冷冻用材料

使用以下材料冷冻细胞:

  • 制备待冷冻的细胞
  • 细胞冷冻培养基,通常为含有添加剂的细胞培养基
  • 冷冻保护剂,如二甲基亚砜 (DMSO)
  • 适合长期储存的冷冻管或其他容器
  • 冷冻方法和冷冻容器
  • 用于长期储存的液氮 (N2) 罐
  • 血清制品,如胎牛血清 (FBS) - 可选

如何冷冻细胞

具体方法因细胞类型和解冻后的最终用途而异。对于使用哺乳动物细胞(包括人体细胞类型)进行的研究应用,以下是一个简单的操作方法列表:

1. 进行细胞传代

使用健康且生长活跃的(处于对数生长期)且尚未多次传代的细胞。最佳做法是在冷冻前 24 至 48 h 进行细胞传代。

2. 制备细胞

进行细胞传代后,将细胞从生长容器中取出。对于贴壁细胞,可能涉及使用细胞解离试剂;在这种情况下,请务必中和该试剂以防止过度细胞损伤。收集所有细胞并对其进行离心。在无菌条件下取出上清液并将之丢弃。

3. 悬浮细胞

细胞冷冻可能会对细胞产生有害影响。为减轻渗透性应激、膜损伤或冰晶形成等损伤,请务必使用含冷冻保护剂(如 DMSO)的细胞冷冻培养基。有些方法会使用血清,但无血清是细胞治疗应用的首选。将细胞悬液分装至适合细胞体积的冷冻管、冷冻袋或其他适当尺寸的容器中。

4. 冷冻细胞

使用液氮、无源冷冻柜或受控速率冷冻柜冷冻细胞。完成冷冻过程后,将冷冻的冷冻管或容器移至液氮罐中储存。

如何解冻细胞

要解冻细胞,请从罐中取出冷冻管并将其置于水浴中或干式自动解冻系统中。解冻后,将细胞转移至预热细胞培养基中。24 h 后检查细胞以确定健康状态和活力。

细胞培养用细胞冷冻培养基常见问题解答

以下是一些与细胞冷冻培养基相关的常见问题与解答。

什么是深低温保藏和细胞冷冻培养基?

深低温保藏培养基(也称为细胞冷冻培养基)是含有基础培养基和冷冻保护剂(可能包括蛋白质)的制剂,用于保护细胞免受冻融过程引起的应激的影响。

为什么我们要深低温保藏细胞?

深低温保藏有助于储存对研究或生物制造有价值的细胞,以保持细胞活力,最大限度地减少污染,并减少遗传改变。深低温保藏的目标是在解冻后使细胞维持在高活力(活细胞百分比)的状态并可在细胞培养基中生长。

如何冷冻干细胞?

该过程与冷冻其他哺乳动物细胞类型的过程类似。然而,务必要使用特定的深低温保藏培养基以确保高活力并维持细胞分化的潜力。

Cytiva 的干细胞深低温保藏培养基设计用于神经祖细胞或干细胞、胚胎干细胞 (ESC) 和诱导多能干细胞 (iPS)。