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疏水相互作用层析

疏水相互作用层析 (HIC) 是一种使用可逆的疏水相互作用从复杂混合物中分离生物分子的分离方法。这种分离技术通常是蛋白纯化策略中的精纯步骤。它利用蛋白表面的疏水区以及目的蛋白与疏水填料上配基之间的相互作用。运行缓冲液的特性会影响蛋白和疏水配基之间的可逆相互作用。

HIC 原理

HIC 在分离具有不同表面疏水性的蛋白时很有用。蛋白在 HIC 填料上的吸附原理是对离子交换和凝胶过滤层析的补充。在疏水层析中,疏水基团(如丁基、辛基或苯基)偶联在层析柱固定相上。具有疏水氨基酸侧链的样品分子被被加载到含高盐缓冲液的HIC 层析柱上。这些蛋白与层析柱中的疏水基团相互作用并结合。

缓冲液中的盐最大限度地降低了样品的溶剂化作用。溶剂化作用降低会暴露疏水区域,以便通过介质快速吸附。高疏水性分子确保结合所需的盐较少。使用盐浓度梯度逐级降低从层析柱中洗脱样品。

HIC 期间需要考虑的因素

疏水相互作用层析期间的一般注意事项包括:

  • 配基:疏水层析填料中的螯合配基类型会影响蛋白吸附。
  • 取代度:增加螯合配基的取代度会增加蛋白结合载量。
  • 基质:常用的支持物为亲水性碳水化合物,如交联琼脂糖和合成共聚物。
  • 盐浓度:向平衡缓冲液和样品中添加结构化盐可增强 HIC 期间的蛋白-配基相互作用。
  • 温度:温度变化会影响疏水相互作用。温度也会影响蛋白的溶解度和结构。温度波动会影响蛋白与疏水填料的相互作用。

疏水填料常见问题解答

以下是关于疏水填料的一些常见问题解答。

什么是疏水层析填料?
疏水填料或疏水层析填料为液相层析的固定相。疏水层析填料由多孔基质组成,例如与配基偶联的琼脂糖微球。疏水填料以散装或预装柱形式提供,用于生物分子(如抗体或质粒)的捕获和纯化或精纯。

什么是 HIC 微球?
HIC 微球构成 HIC 中使用的填料。HIC 微球具有不同的粒径和浓度。琼脂糖微球是疏水填料的常用基质。也会使用聚苯乙烯/二乙烯基苯。基质结构允许层析期间流动相在填料上移动。

有哪些不同的疏水配基?
常见的HIC 配基包括苯基、丁基和辛基基团。Cytiva 提供多种使用这些配基的疏水填料。

如何选择疏水层析填料?
根据目标生物分子的疏水性选择疏水填料。我们提供筛选和选择试剂盒帮助您选择适合高流速、高载量和高分辨率的填料。您也可以使用我们的 Purify 网络应用程序,帮助选择适合您需求的填料或预装柱。