描述

TempliPhi 大分子量载体构建试剂盒（TempliPhi LC 试剂盒）专为制备 BAC 或福斯质粒 DNA 测序模板而开发。TempliPhi 方法利用噬菌体 Phi29 DNA 聚合酶通过滚环扩增 (RCA) 指数扩增单链或双链环状 DNA。这种等温扩增方法可在数小时内从皮克起始样品中产生微克的 DNA。极少量模板 DNA 的体外扩增无需过夜细胞培养和常规质粒或 M13 DNA 纯化。Phi29 DNA 聚合酶的校对活性可确保高保真度 DNA 复制。

扩增的起始物料可以是少量的细菌细胞，其中包含 BAC 或 fosmid DNA，或任何环状 DNA 样本。细菌菌落可从琼脂平板上挑出并直接添加到 TempliPhi LC 反应中。或者，微量的细菌培养物或甘油原液也可用作起始样品。不管什么起始样品，扩增都可于 30°C 下在 18 小时内完成，且无需热循环。TempliPhi 大型构建体反应的产物是环状模板的高分子量双链多联体。其产物是双链 DNA，可以用正向和反向引物测序。通过 TempliPhi 大分子量载体构建试剂盒扩增的 DNA 无需任何纯化即可直接用于下游测序反应。