您是否曾在层析柱填料柱床上看到气泡?或者填料柱床和适配器之间存在间隙?

这表明层析柱存在问题,不能放心地纯化蛋白。但是无需绝望!这些问题通常很容易解决。

例如,填料柱床中存在气泡,原因很简单,例如层析柱硬件组装不当。而填料柱床和适配器之间存在间隙,可能是因为层析柱填充不当。

Cytiva R&D 蛋白纯化专家总结了这些问题的常见原因及解决方法。

层析柱内有空气
柱床被压缩
可能原因

补救措施

缓冲液脱气不当

  • 彻底脱气缓冲液。将脱气的平衡缓冲液通过层析柱以除去空气

上样或纯化方法构建不当

  • 使用空气传感器,以防止空气进入系统

层析柱硬件组装不当或存在机械损坏

  • 填充前确保层析柱组装正确且无损坏

入口过滤器堵塞或部分堵塞

  • 如果可能,更换或清洁入口过滤器

在低温下填充或储存层析柱,然后预热

  • 将脱气缓冲液通过层析柱以去除小气泡
  • 使用储存在冷藏室或冰箱中的缓冲液时,必须特别小心
  • 请勿在阳光下或通过加热系统预热层析柱。如果可能,重新填充层析柱

泵前流路的其他限制

  • 检查入口侧的管路和连接
可能原因

补救措施

背压增加或柱床填充不足

未按说明填充层析柱

流速太高

  • 请勿超过填料或预填充柱的最大流速

填料柱床被压缩

层析柱在过高压下运行

  • 如果使用推荐的流速,请按照说明清洁层析柱
  • 请勿超过填料或预填充柱的推荐操作压力
  • 对于自填充柱,使用 UNICORN™ 系统控制 (System Control) 软件的”层析柱处理”功能保存定义的层析柱及其压力数据。然后选择该方法来保护该层析柱类型不受过高压的影响

压力变化快

  • 避免突然更改为高流速
  • 流动过程中请勿转动阀门

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