补救措施

层析柱填充不良

• 测试层析柱性能。必要时重新填充层析柱
• 采用预填充柱

层析柱顶部混合空间较大

• 如有必要，将顶部适配器调整到填料表面

洗脱条件不理想（例如，梯度太陡、流速太高）

• 更改洗脱条件（例如，使用较浅的梯度、降低流速）

蛋白在层析柱中沉淀

• 遵循说明中的清洁程序
• HIC*：降低缓冲液中的盐浓度，或使用现有的缓冲液但应用低盐浓度的样本品等分试样
• IEX*：在运行期间修改缓冲液、pH 值和/或盐条件以保持稳定性

层析系统中的管路太长太宽

• 减小管路直径并最小化长度

稀释的蛋白在层析柱出口和紫外流通池之间被分离

• 通过减小管路直径和长度以最小化层析柱后体积
• 更换为更小体积的进样阀和柱阀以及流通池

补救措施

样本太粘稠

• 用缓冲液稀释，但检查最大样本体积。将蛋白浓度保持在 50 mg/mL 以下

样本含有颗粒

• 重新平衡层析柱，用低蛋白吸附过滤器（例如用于 ÄKTA™ 层析系统针式过滤器的 Protein Prep）过滤样本，并重复上述步骤

层析柱变脏

• 清洁并进行重新平衡

SEC 填料类型不正确

• 在可用的选择指南中检查选择性曲线

样本体积太大

• 检查建议，并减少加载的样本体积

流速太高

• 检查建议，并降低流速

在上样阀和层析柱入口之间、层析柱出口和紫外流通池之间和/或进一步到组分收集器之间稀释样本

通过以下任一方式最小化层析柱前后的体积

• 减小管路直径并最小化长度
• 将层析柱直接安装到紫外池（无柱阀）
• 去除流路中所有不必要的组件
• 更换为更小体积的进样阀和柱阀以及流通池