系统泵

ÄKTA™系统泵为柱塞泵，通过柱塞杆的往复运动，为缓冲液进入系统提供动力。每个泵头分为泵前腔（金属部分）和泵后腔（塑料部分）两个部分。泵前为缓冲液经过的腔室，泵后为泵后润洗液存在的腔室，二者是相互独立的腔室。

图1. ÄKTA™ pure系统单个泵头剖面图

1. 如果是系统泵抽不上液体，请按照如下方法解决：

抽不上液体一般是由于泵前腔进气导致的，此时可以进行手动排气，详细步骤请点击此处。

2. 如果是泵后润洗系统不流动，请按照如下方法：

泵后腔中充满20%的乙醇，一方面起到润滑柱塞杆的作用，另一方面可以抑制泵后腔长菌。泵后的橡胶软管中有气泡对实验没有影响，但需要确保系统泵运行起来之后，泵后润洗系统能够正常运转（鉴定方法：系统泵运行起来之后，ÄKTA™ pure上距离50 mL管最近的泵头顶端回到50 mL管的软管，ÄKTA™ avant中50 mL离心管中较短的软管，可以滴液体。若相应的软管没有在滴液体，说明泵后润洗系统没有正常运转），若泵后润洗系统无法正常运转，可用注射器对泵后润洗系统进行抽气（如下图）（注意此时请保证储液管中有足够的20%乙醇，抽气时放在储液管中的两端只有一端可以抽的动）。

图2. 泵后腔软管排气

视频操作：ÄKTA™™ pure 完整操作演示_哔哩哔哩_bilibili（约在2:05S）

ÄKTA™ 系统手动排气过程：

排除管路气泡：

  1. 将需要排气的缓冲液入口放在对应的缓冲液中；打开System Control，在流路图中选择对应的管路。
  2. 选择要填充缓冲液的入口管路， 按逆字母顺序选择位置并从最大的数字开始。

    图 1. 缓冲液入口选择

  3. 将 30 mL注射器连接到需排气泵头的蝴蝶夹上。 确保注射器与蝴蝶夹连接紧密。

    图 2. 蝴蝶所在位置

  4. 逆时针旋转四分之三圈打开清洗阀，将液体缓慢吸入注射器，直到液体到达泵头。
  5. 顺时针旋紧关闭清洗阀， 取下注射器。
  6. 对于所有要使用的入口管重复步骤 3 到 6。

系统泵 B的排气处理：

  1. 确保连接到进样阀端口的废液管 W1 放入废液容器中。
  2. 进样阀流路设置为System pump waste来降低排气过程的反压。

    图 3. 进样阀流路选择图

  3. 将“Conc % B”设置成100 %。

    图 4. 系统梯度设置

  4. 将管路设置成对应要使用的管路。

    图 5. 缓冲液入口选择

  5. 设置系统流速：将系统流量设置为 ÄKTA™ avant  25 的 1.0 ml/min 或ÄKTA™ avant  150 的 10.0 ml/min。

    图 6. 系统流速及梯度设置

  6. 将 30 mL注射器连接到需排气泵头的蝴蝶夹上。确保注射器与蝴蝶夹连接紧密。

    图 7. 系统泵排气示意图

  7. 逆时针旋转四分之三圈，打开清洗阀。 将少量液体缓慢吸入注射器（以每秒约 1 mL的速度）。
  8. 顺时针旋紧关闭清洗阀，取下注射器。
  9. 保持系统继续运行的条件下将注射器连接到系统泵 B 的另一个清洗阀，然后重复步骤 6 到 8。

验证泵 B 气泡的排除：

  1. 在流路设置进样阀的状态为“Manual load”。

    图 8. 进样阀流路示意图

  2. 确保系统泵持续运行。
  3. 检查 PreC 压力曲线。如果 PreC 压力曲线逐渐稳定，则泵中空气已排除完毕。

系统泵 A的排气处理：

按照与清洗系统泵 B相同的步骤清洗系统泵 A 的两个泵头，但将步骤 3 替换为以下操作：设置“Conc % B”为0 %。

图 9. 系统流速及梯度设置

视频操作：ÄKTA™™ pure 完整操作演示_哔哩哔哩_bilibili（约在1:30S）

执行 Pump wash 命令时系统流路示意图如下图。此时废液从样品阀的 W1 出口排出。且在执行该命令时需手动选择某个缓冲液入口管进行A或B泵的 Pump wash 操作，不能够A、B泵同时开启。

图1. 系统流路示意图（Pump wash-A1）

执行 System wash 命令时有两个选项（如下图）。如果此时系统正在运行中，执行该命令后会继续使用当前缓冲液入口进行系统清洗（即可以A、B泵同时开启）；如果系统没有运行，默认使用A1入口进行系统清洗。

图2. 手动命令设置（System wash）

选择 Injection valve 选项时与 Pump wash 命令相同，选择 Oulet valve 选项则如下图所示。

图3. 系统流路示意图（System wash-A1-Out）

此时废液会从出口阀的废液出口排出。

如果在一定时间后发现有液面下降，可能是由于液体挥发等原因，可更换新的润洗液并观察下降速度。

在设备正常运行中，泵后润洗系统储液管中液面下降或上升非常厉害，说明泵密封圈出现渗漏，需更换。请联系您身边的 OptiRun 售后支持团队。

  1. 将保护液存放管拆下，在管中重新注入50 mL新鲜配制20%乙醇。

    图1. 保护液存放管卸载示意图

  2. 将泵后保护液入口管浸入保护液存放管后，将保护液存放管重新安装在机器上。
  3. 将空注射器连接到泵后保护液出口管上，缓慢的重复抽吸动作，直至看到泵后保护液入口管、出口管均充满液体。

    图2. 注射器抽吸示意图

  4. 拔下并丢弃注射器。
  5. 此时观察管内20%乙醇的含量，可适当补充保护液以确保入口管、出口管均浸没在保护液中。

    6. 注意：50 mL 离心管中的20% 乙醇要定期更换。建议每周更换一次。

一般是由泵腔进气造成。具体解决方法，可点击此处。

  1. 如果软件显示的泵流速实时变化，并不能到达设置的流速，一般是因为启用压力控制流速的功能，此时压力到达了压力报警数值的90%，流速不再上涨。
  2. 如果软件显示的泵流速和实际运行时测定的流速不符，则通过以下步骤排查原因：
    1. 首先将柱位阀bypass或者将层析柱从系统上拆下来并将进样阀和紫外监测器用管线相连，此时再次确认测定的流速是否与设置的流速相符，如果相符，说明层析柱中有大段空气。
    2. 如果流速依然不符，则推测泵腔进气，详情请点击此处。
    3. 如果依然存在问题，请联系您身边的 OptiRun 售后支持团队。

样品泵

排除管路气泡：

  1. 确保在运行期间将要使用的样品入口管都放入到合适的样品；
  2. 确保连接到进样阀端口的废液管 W2 已放入废液瓶中；
  3. 打开System Control，在流路图中选择对应的管路或选择要填充样品的入口管路， 按逆字母顺序选择位置并从最大的数字开始。

    图 1. 缓冲液或样品入口选择

  4. 将 30 mL注射器连接到需排气泵头的蝴蝶夹上。 确保注射器与蝴蝶夹连接紧密。

    图 2. 蝴蝶所在位置

  5. 逆时针旋转四分之三圈打开清洗阀，将液体缓慢吸入注射器，直到液体到达泵头。
  6. 顺时针旋紧关闭清洗阀， 取下注射器。
  7. 对于所有要使用的入口管重复步骤 3 到 6。

样品泵的排气处理：

如果管路填充完成并且验证表明泵中没有空气，则没有必要排泵中的气泡。但是，如果压力信号指示泵中存在气泡，请按照以下说明排除样品泵的两个泵头。

  1. 确保连接到进样阀端口的废液管 W2 放入废液容器中。
  2. 进样阀流路设置为 Sample pump waste 来降低排气过程的反压。

    图 3. 进样阀流路选择图

  3. 在 Process Picture→Buffer 图标 → Buffer → 图标S ，设置 Sample flow：将 ÄKTA avant 25 的样品流量设置为 1.0 mL/min或 ÄKTA avant 150 的 5.0 mL/min。

    图 4. 样品泵流速设置

  4. 将 30 mL注射器连接到需排气泵头的蝴蝶夹上。确保注射器与蝴蝶夹连接紧密。

    图 5. 系统泵排气示意图

  5. 逆时针旋转四分之三圈，打开清洗阀。 将少量液体缓慢吸入注射器（以每秒约 1 mL的速度）。
  6. 顺时针旋紧关闭清洗阀，取下注射器。
  7. 保持系统继续运行的条件下将注射器连接到样品泵的另一个清洗阀，然后重复步骤 4到 6。

大体积上样可以通过样品泵来实现。在ÄKTA™ pure上可配置样品泵来实现；在ÄKTA™ avant上样品泵是标配，无需额外配置；在ÄKTA™ go上直接标配了样品入口，通过系统泵完成大体积上样过程，无需额外配置。

使用样品泵完成完全体积样品的上样，可以在UNICORN™软件中进行设置。

  1. 打开UNICORN™软件的Method Editor模块，点击新建一个层析方法。找到Sample Application阶段，如下图1
  2. 在上样方式的选项中，选择Inject sample directly onto column
  3. 右侧选择上样入口，再选择Inject all sample using air sensor选项，可以在下方设置最大上样体积，比如1000 mL
  4. 勾选Finalize sample injection，并进行体积的设定，即可在上样后用buffer将样品入口阀到进样阀之间的样品继续推入柱子。
  5. 继续将方法编辑完毕进行保存，即可在System Control模块完成用样品泵实现完全体积的自动上样。

图 1 Method Editor中进行完全体积上样的设置

使用样品泵完成特定体积样品的上样，可以在UNICORN™软件中进行设置。

  1. 打开UNICORN™软件的Method Editor模块，点击新建一个层析方法。找到Sample Application阶段，如下图1
  2. 在上样方式的选项中，选择Inject sample directly onto column
  3. 右侧选择上样入口，再选择Inject fixed sample volume，并设置需要上样的特定体积，比如50 mL
  4. 勾选Finalize sample injection，并进行体积的设定，即可在上样后用buffer将样品入口阀到进样阀之间的样品继续推入柱子。
  5. 继续将方法编辑完毕进行保存，即可在System Control模块完成用样品泵进行特定体积的自动上样

图 1 Method Editor中进行特定体积上样的设置

混合器

混合器M9是一款基于磁力搅拌的混合器，其目的是保证梯度混合的精确性，从而实现更加准确、重复性更好的层析过程。为避免堵塞层析柱及流路，混合池内整合了10 μm 孔径的滤膜。滤膜需要定期清洗或更换，否则会导致系统压力升高。

  1. 混合器滤膜的更换：
    将M9混合器两端的接头拧下，直接从系统中拔出。拔出后直接将混合器拧开（请勿拆掉两端的环形卡箍），即可看见白色（如果滤膜较脏，可能呈现灰色）的圆形滤膜。使用镊子将滤膜取下，放入新的滤膜。将混合器重新进行拧合，装回系统中，再将接头拧回混合器。进行系统CIP。每台设备会随附一包10片装的全新滤膜，如有需要可另行购买。
  2. 混合器滤膜的清洗：
    将滤膜取出后，可将其浸泡于 0.5 M NaOH溶液，超声洗涤至少5 min。洗涤后装回，进行系统CIP。如清洗不彻底，则需要更换新的滤膜。

相关产品：Online filter kit

视频操作：ÄKTA™™ pure 完整操作演示_哔哩哔哩_bilibili（约在2:40S）

  1. 混合器可供选择的腔室体积包括：
    1. Mixer chamber 0.6 mL
    2. Mixer chamber 1.4 mL（ÄKTA™ pure / avant系统标配）
    3. Mixer chamber 5 mL（ÄKTA™ pure / avant 150随附系统）
    4. Mixer chamber 15 mL
  2. 建议流速梯度对应混合器腔室体积:

    混合池容积 适用流速 (两泵梯度)
    0.6 mL 0.1 - 5 mL/min
    1.4 mL 0.5 – 10 mL/min
    5 mL 5– 25 mL/min
    15 ＞25 mL/min

    注意：ÄKTA™ pure / avant 25适配0.6 mL, 1.4 mL, 5 mL三种体积的混合器；ÄKTA™pure / avant 150适配 1.4 mL, 5 mL, 15 mL三种体积的混合器，不可将0.6 mL混合器用于ÄKTA™ pure / avant 150和15 mL混合器用于ÄKTA™ pure / avant 25设备，以免造成危险。