常见问题
- 一般而言,常见的缓冲溶液,例如PBS,HEPES等盐溶液都能做Buffer使用。
- 按照经验,HEPES(2- 羟乙基 -1- 哌嗪乙烷磺, pKa 7.55) 是一种适用于许多蛋白 - 蛋白相互作用的理想缓冲成分, 现有商品化的 10 mM HEPES 缓冲液与 Biacore 系统配套一起使用。
- PBS缓冲液通常更适合用于小分子分析物, 这是因为有机缓冲成分如 HEPES 能够与配体结合并干扰低分子量化合物的准确检测。
- 激酶(Kinase)实验则使用Tris缓冲液。
如果发生非特异性结合, 则可能需要尝试更高的离子强度来降低非特异性结合。
- 推荐在所有缓冲液中包含非离子型表面活性剂(0.05% 表面活性剂P20) 以尽量减少蛋白质和其他生物分子在流动系统中发生沉淀的可能。需要注意的是一些应用需要缓冲液中不包含表面活性剂, 特别是那些涉及脂类囊泡和 /或疏水性蛋白的应用。
- EDTA 以去除可能存在于缓冲液中的微量游离二价金属离子。
橡胶管盖可以重复使用,使用时现将管盖用ddH2O清洗干净,放入70%的乙醇溶液浸泡,再次使用时用清水冲洗并风干管盖。
该试剂为次氯酸钠,因为是危险化学药品,海关不能进口,需要自行购买(尽量购买有效氯浓度高一些的10%-15%的次氯酸钠,推荐分析纯),工作使用时有效氯使用浓度1%,过滤后使用即可。