常见问题
首先根据不同的种属亚型参考“相对结合强度”表（如下图），Protein A和Protein G 均结合抗体的重链部分，若存在 Protein A 及 Protein G 都有较强结合能力时， 更加推荐 Protein A。 Protein A 的洗脱条件（pH 3.5–4.5）较 Protein G（< pH 3）更加温和，利于对低 pH 敏感抗体的稳定性。 另外， Protein A 有耐碱清洗的 PrismA或 SuRe 配基可供选择，且载量更高。 尤其是纯化多个抗体，为了避免交叉污染，优先推荐耐碱清洗的填料，长久使用更经济。
Protein G Sepharose 来源于链球菌， 为细胞表面的 III 型 Fc 受体。 可以广泛、更强地结合更多类型的IgG、 多克隆 IgG 及人 IgG。同时， 重组表达的 Protein G 去除了 N 端白蛋白结合结构域， 血清蛋白结合水平更低。 此外，Protein G 还可以和某些抗体的 Fab 和 F (ab’)2 段结合。 但是，其工业化程度低于 Protein A。
Protein L结合抗体的轻链可变区，适合抗体片段的纯化。同时Protein L对于某些种属亚型有结合能力，可以作为Protein A和Protein G的有效的补充。
不同配基结合特征如下：
- rProtein A 和 PrismA 配基可以结合抗体 Fc 区域以及重链可变区VH3。
- Protein G 配基除了与 IgG 的 Fc 区域特异性结合，还可以和某些抗体的 Fab 段结合。
- Protein L 配基对于人 kappa I, III 和 IV 亚型以及小鼠的 K1 轻链有很强的亲合力，结合位点在 Kappa 轻链的可变区。
- KappaSelect 层析介质与人 KappaFab (恒定区) 结合，以及LambdaFabSelect 层析介质与人 LambdaFab( 恒定区 ) 结合。
腹水中经常含有高浓度的脂蛋白，这些脂蛋白和脂类物质会堵塞层析柱，最好能在纯化之前去除。方法一是在二价离子存在的情况下，硫酸右旋葡糖酐能够沉淀脂蛋白，沉淀可以通过离心除去；方法二是PVP 能产生一个 pH 值依赖的沉淀效应， PVP 在 pH＝ 7.0 时能够沉淀 β- 脂蛋白和球蛋白。另外，有些客户也会使用硫酸铵沉淀法。具体操作方法请参考抗体纯化手册。
- 用 3 CV 结合缓冲液清洗层析柱。
- 用至少 2 CV 15 mM NaOH 清洗。接触时间 10到 15 分钟。
- 立即用至少 5 CV 结合缓冲液清洗层析柱。