Sephadex

根据应用目的的不同，凝胶过滤层析主要可以分为以下三种方法：

• 制备级凝胶过滤纯化 ：对于分辨率有较高的要求 ：(1) 上样体积一般在柱体积的 0.5% – 4% ；(2) 运行较低的流速 ；(3) 使用较高的柱子 ( 一般 ≥60 cm)。经过纯化后的样品将被直接置换到合适的缓冲液条件中，用于后续的实验或储存。
• 分析型凝胶过滤层析 ：对于分辨率有很高的要求，上样体积一般在柱体积的 0.3% – 0.5% ，使用柱子的高度一般为 30 cm。而在快速纯度检测和筛选实验中，常用的是 15 cm 柱高的柱子，可以在提供足够的分辨率的前提下，缩短运行时间，节省样品和缓冲液。
• 脱盐与缓冲液置换 ：与上述的精细分离不同，脱盐或缓冲液置换属于组分分离，即将大分子样品与小分子或离子进行分离的过程，因此对于分辨率的要求相对不高。上样体积可达柱体积的 30% 。

自1959年 Sephadex 葡聚糖凝胶被发明以来，Cytiva 的凝胶过滤层析填料经历了葡聚糖 - 琼脂糖 - 交联的葡聚糖与琼脂糖的发展路线：

• Sephadex G 系列，交联葡聚糖：由于粒径大且不均一、机械性能较差，目前一般主要用于脱盐与缓冲液置换。
• Sepharose 系列，交联琼脂糖：分离范围上限非常大，是大分子 (例如病毒颗粒、DNA 质粒等) 快速分离的常用填料。也是很多亲和、离子和疏水填料的基架。
• Sephacryl S 系列，葡聚糖交联 N, N’ －亚甲基二乙酰胺，经济，高效。分离范围很大，排阻极限甚至可以达到 10⁸ Da。
• Superose 系列，线性多聚糖填料：宽广的分离范围配合高分辨率。
• Superdex 系列，结合了 Sephadex 的高选择性和琼脂糖的高物理稳定性：是目前分辨率、选择性最高的凝胶过滤填料，并且还具有化学稳定性高、非特异性吸附低等优点，成为广受欢迎的凝胶过滤层析产品。Superdex Increase 系列预装柱则是进一步减小了填料粒径，显著提升了分辨率。"

Sephardex目前有Sephadex G10凝胶过滤填料 ，G15，G25，G50，G75，G100这几个产品，填料产品均为干粉状态。其中G10，G25，G50有针对样品进行前处理的预装柱，其余产品均无预装柱。如有需求可联系我们进行定制生产。

在分离范围上是相同的。SF:Superfine超细颗粒; F : Fine细颗粒; M : Medium中等颗粒; C : Coarse粗颗粒; 分别表示填料的颗粒大小粗细。颗粒越大流速越快，颗粒越细分辨率越高，同时反压也越高。

分子筛属于非吸附式层析，运行时只需要一种缓冲溶液，具有非常好的兼容性，基本上只需要考虑蛋白的稳定性来选择合适的缓冲液。一般在实验中会加入 150 – 300 mM 的 NaCl，以降低离子型的非特异性吸附。若有添加剂的使用，需要参考对应填料的说明书或者 Data File 中的化学试剂耐受信息，并且考虑是否需要做空白实验用于扣除添加剂本身对紫外检测的影响。另外，使用不同的溶液时 ( 例如加入了甘油等成分 )，因为溶液本身粘稠度的不同，请适当降低流速以保护柱子。

脱盐柱的原理是凝胶过滤层析的组分分离，主要需要考虑以下两个关键参数：

1. 填料的分离范围。常规的大于 5k Da 的蛋白可以选择 SephadexG - 2 5 凝胶过滤层析填料，对于小分子量的蛋白或者多肽，可以选择Sephadex G-10（分子量大于 700 Da）的填料，也可以根据不同G系列填料分离范围进行选择。
2. 上样体积。一般脱盐实验的上样体积不超过柱体积的 30%，如果需要分离更精确，则可以进一步减少上样体积。根据操作方式的不同，有不同类型的产品提供 ( 以最常用的Sephadex G-25 为例 ) ：重力柱系列，可手动注射或连接 ÄKTA 器使用的 HiTrap 系列，更大体积连接 ÄKTA 仪器使用的 HiPrep系列。当需要处理比较大体积样品的时候，也可以考虑将多根HiTrap 或者 HiPrep 柱子串联使用，或者购买空柱及散装填料自行装填。

一般脱盐实验的上样体积不超过柱体积的 30%。可以选择较大的预装柱或自行装填料。HiTrap Desalting 5 ml (SephadexG-25S) 预装柱可以串联 3-5 根，而 HiPrep 26/10 Desalting 53 ml (Sephadex G-25F) 也可 4 根串联，使上样体积拓展至 60 mL

PD-10 desalting columns 产品设计为一次性使用。如果想要重复使用，可以尝试。最好用于同一样品的纯化，可以考虑使用0.1 – 0.2M NaOH 清洗柱子。使用脱盐柱时，蛋白样品主要经过外水体积流出，因此使用后填料还是较干净的。需要注意清洗后的使用效果是否会受到影响。