常见问题

多模式层是指利用一种以上相互作用的模式,彼此单独或者协同发挥作用的层析方式。通过至少一种含有多个相互作用位点的配基实现分离。根据实验条件的不同,发挥作用的相互作用种类不同 :包括静电,疏水作用,氢键, π-π 相互作用,亲硫相互作用等。现有的多模式填料包括 :

  1. 分子筛与疏水、离子交换模式的复合 Capto Core 700多模式层析填料,Capto Core 400,用于传统病毒类疫苗、病毒载体、病毒样颗粒 VLPs、外泌体和质粒等大分子样品或复合物的纯化。
  2. 离子交换与疏水模式的复合:
    • 强阴离子复合模式 Capto adhere 和 Capto adhere ImpRes,常用于内毒素、HCP、核酸等的去除,新应用例如质粒纯化中有效分离 scDNA 和 ocDNA;
    • 弱阳离子复合模式Capto MMC 和Capto MMC ImpRes,常用于抗体的精细纯化。MMC ImpRes 比MMC 粒径小,且配基密度低更易洗脱。

相对于单一作用的层析方法如离子交换,由于多种模式共同作用,多模式填料的结合和洗脱条件摸索更加复杂。多模式填料可以实验跨等电点结合,从而具有特殊的选择性和更宽的操作空间。由于 pI 无法提供很好的结合和洗脱条件参考,条件筛选显得更为重要,可以使用高通量产品如 PreDictor 或 RoboColumn™ 等,借助 DOE 的方法进行摸索,再进行后续验证。

Capto Core 家族是非常特殊的一类填料,和均匀的琼脂糖填料不同的是,这类填料有一个约 5 um 的惰性外壳,可以将大分子排阻在外,直接流穿 ;复合强吸附配基手臂辛胺基被隔离在内部,只能结合进入到孔里面的物质,通常可以有效的去除 HCP, DNA( 切碎 ),内毒素,酶类等一切可以进入到孔里的东西,能够在很宽的 pH 和离子强度下操作,一般无需换液。

Capto Core 700 应用领域主要是分子量大于700KD 的病毒 / 大分子纯化。如有样品在 Capto Core 700 上收率不佳,有明显吸附现象,可尝试 Capto Core 400( 分子量排阻为 400 KD) 进行优化。二者的分界线大致在 40-50 nm。典型的病毒纯化应用,请参考下图:

HiTrap Capto Core 700 可以用注射器来操作。HiScreen 的柱子不推荐注射器操作,容易超压。散装填料可以用重力的方式操作。另外, Capto Core 700 的复合模式设计,将大分子样品排阻在外,小分子吸附到核心内部的辛胺配基上,因此也可以采用孵育的方法进行操作。但是,手动操作,实验的重复性没有仪器好。

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