常见问题
- 捕获质粒DNA，去除RNA杂质。使用Sepharose 6 Fast Flow进行第一步纯化，它可根据分子大小的不同，对不同的组群进行分离，即分子筛原理。质粒DNA和RNA的分子量差异很大，因此上样量可以达到0.3CV。在纯化时，可同步进行缓冲液置换，直接与第二步亲和层析纯化进行无缝对接。
- 去除开环质粒DNA。使用Capto PlasmidSelect进行第二步纯化，它可以特异性将开环的质粒DNA (ocDNA)和超螺旋的质粒DNA (scDNA)分开。与传统的PlasmidSelect Xtra相比，Capto PlasmidSelect可以在更高的流速条件下获得更高的载量，其DBC可以达到3 mg/mL，经过二步纯化后，超螺旋质粒DNA的纯度可以提高到95%以上。
- 去除痕量杂质及内毒素。经过前两步层析纯化之后，质粒的纯度和均一性已经满足了生产需求，但依然存在内毒素的隐患，最后一步层析的重点即是去除内毒素和痕量杂质。使用高分辨率阴离子SOURCE 30Q或者Q ImPres进行精纯后，内毒素含量可降至<1 EU/mg。