作者：Manyu Luo et al.
发表日期：2019年3月
发表期刊：Biotechnological products and process engineering
研究背景
大肠杆菌 (E. Coli) 表达系统可以经济高效地生产抗原结合片段 (Fabs)。然而，大肠杆菌的细胞质表达的Fab倾向于形成聚集体，从而大大降低了正确折叠的蛋白质的产量。为了解决这个问题，发展出了一系列不同的表达系统，本实验中五个Fab片段均在BL21 (DE3) 中表达，分泌到培养基中的Fab通过对轻链恒定区特异的亲和层析进一步纯化。然后评价纯化后的Fab产物，发现其具有高纯度，抗原结合亲和力和体外生物活性相似。
实验方法
收获后上清液4 ℃条件下12,000 g 离心30 min。由于Capto L对IgG的IgG I、III和IV型κ可变区具有很强的亲和力，因此能够用来纯化αHer，αVEGF，αRANKL，和αPDF几种Fab。 pH 7.4的PBS作为结合缓冲液，将离心后的上清上样至柱体积为1 mL的 Capto L柱，流速为0.5 mL/min。 然后用pH 7.4，0.025 M柠檬酸钠+ 0.025 M磷酸钠，淋洗直至280 nm的紫外吸收回归基线。最后用pH 2.3，0.025 M柠檬酸钠+ 0.025 M磷酸钠洗脱目标蛋白，流速为1.0 mL/min。
使用KappaSelect填料纯化带有II型IgG κ轻链的αIGF1R。 纯化过程与Capto L相似。PBS平衡后上样和淋洗。 洗脱缓冲液为pH值为2.7的0.1 M甘氨酸缓冲液。最后对收集得到的样品进行包括纯度，完整性，亲和力和生物活性的鉴定。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17545812 | HiTrap Kappaselect | 1 × 5 mL |
| 填料 | 17547806 | Capto L | 5 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
