作者：Mingqian Feng et al.
发表日期：2018年11月
发表期刊：Antibody Therapeutics
研究背景
鲨鱼VNAR (新抗原受体可变结构域) 和骆驼重链可变结构域 (VHH) 抗体等两种抗体都可以分离为可溶的、稳定的、单体结合结构域。IgNAR抗体是由重链组成的同源二聚体蛋白，尽管鲨鱼VNAR鲜为人知，但它具有用于生物治疗的潜力。Shark VNAR结构域可能具有优于传统IgG的优势特性。
噬菌体展示技术已被用于分离鲨鱼VNAR抗体。在这项研究中，开发了一种基于PCR延伸组装和自连接的方法 (命名为EASeL)，以从六只护士鲨中制作一个大型噬菌体展示的VNAR单域库。为了评估其多样性并在该领域最大规模地分析VNAR序列，我们对119万个独特的全长VNAR进行了下一代测序 (NGS) 分析。然后使用无偏方法分析独特序列，以研究所有VNAR序列以及I型和II/III型VNAR分别的半胱氨酸数和CDR3长度。为了验证该文库作为发现治疗性抗体的新平台的潜力，我们进行了噬菌体淘选，以鉴定鲨鱼VNAR结合物与一组肿瘤和病毒抗原的结合。
实验方法
将含有VNAR结合剂的pComb3x噬菌粒转化到HB2151大肠杆菌细胞中。将形成的菌落汇集在含有2%葡萄糖、100 μg/mL氨苄青霉素的2 L 2YT培养基中，在37°C下培养到OD600达到0.8–1。 然后将培养基更换为含有1 mM IPTG (Sigma)、100 μg/mL氨苄青霉素的2YT培养基，并在30°C下摇动过夜以产生可溶性蛋白质。 将细菌颗粒离心并在37°C下用多粘菌素B (Sigma) 裂解1小时以释放可溶性蛋白质。 裂解后收集上清液，并使用HisTrap柱使用AKTA进行纯化。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17524802 | HisTrap HP | 5 × 5 mL |
| 填料 | 17526801 | Ni Sepahrose HP | 25 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/ 20 |
