作者：Hong H et al.
发表日期：2021年2月
发表期刊：Chemical Science
研究背景
纳米抗体，也被称为单域抗体，是一种重链抗体，具有单一的可变抗原结合域。与传统单抗相比，纳米抗体具有体积小、特异亲和力高、稳定性高、溶解度好、易于制备和操作、免疫原性低等特点。然而，由于缺乏Fc区和较差的药代动力学特征，使得纳米抗体在癌症免疫治疗上应用受到限制。抗体招募分子（ARMs）是有细胞靶向部分和抗体结合部分组成的双功能分子，可用于诱导免疫细胞消除靶细胞。本研究中，构建一种工程化的通用内源性抗体招募纳米抗体UEAR Nbs，该纳米抗体通过GS连接子将IgG结合域与纳米抗体融合，融合的位点与IgG 和免疫细胞上人Fc受体结合区域不同，证明通过该位点进行纳米抗体的融合将不会影响IgG Fc片段的生理功能。UEAR Nbs可在血清中招募大量内源性IgG、半抗原特异性抗体到癌细胞表面，并发挥Fc片段介导的抗癌生物学机制，在体内、体外实验中均有消除癌细胞的功能。同时，UEAR Nbs也改善了纳米抗体的药代动力学，延长体内的半衰期。工程化的纳米抗体UEAR Nbs在大肠杆菌中重组表达。UEAR Nbs能够识别癌细胞，将通用内源性IgG招募到癌细胞表面，通过IgG Fc片段介导机制的参与，触发ADCC、CDC和ADCP等免疫反应，精准消灭肿瘤细胞。
实验方法
构建重组质粒pET22b-7D12-ZZ和pET22b-ZZ-7D12，转导至E.coli BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白。通过ÄKTA avant系统使用Ni-NTA亲和柱进行亲和层析，4℃下上样孵育2h，使用10-40 mM咪唑洗杂，250 mM咪唑进行蛋白洗脱。洗脱的目标蛋白使用HiPrep Desalting凝胶柱进行脱盐。纯化的蛋白使用SDS-PAGE进行检测，胶图结果显示，7D12和ZZ结构域蛋白在16kDa左右以单条带形式出现，7D12-ZZ和ZZ-7D12纳米抗体在32kDa左右以单条带形式出现。7D12、ZZ结构域、7D12-ZZ和ZZ-7D12蛋白纯化后的产量分别为40、90、50和100 mg/L。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17525501 | HisTrap FF | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 17508701 | HiPrep 26/10 Desalting | 1 × 53 mL |
| 填料 | 17531802 | Ni Sepharose 6 FF | 25 mL |
| 空柱 | 28964441 | HiScale 16/20 | 16/20 |
