作者：Chu Y et al.
发表日期：2021年3月
发表期刊：Soft Materials
研究背景
近几十年来，包括脂质体在内的纳米医学载体取得了长足的进步。然而，纳米载体仍面临着相当大的挑战。纳米药物的环境是相对复杂的生理环境。一旦被注射到生物介质中，纳米药物会被大量的生物分子迅速包围，形成生物冠 (corona)。而它已被证实可以影响纳米药物在体内的行为，包括许多方面，例如靶向能力、半衰期、药物的释放、生物分布和免疫原性等等。所以，破译蛋白冠的结构和功能特征成为关键，基础研究可以帮助我们完成对纳米载体从头设计和精准用药的任务。
在此之前，离心是最常用的研究蛋白冠的方法之一。具体来说，通过高速离心 (通常在 12 000-14 000 × g 离心 15-30 分钟) 收集纳米药物-蛋白质复合物，然后再经过几轮缓冲液洗涤以去除未结合的蛋白质。然而，由于囊泡状纳米载体 (如脂质体) 的含量极低，离心很难得到。并且蛋白质、细胞骨架蛋白、高密度囊泡和具有高分子量的超分子很容易污染蛋白冠。而如果清洗不彻底，高丰度的蛋白质可能被误认为是蛋白冠的一部分。如果清洗过于剧烈，一些蛋白冠上松散结合的蛋白质会丢失。
所以，在本研究中，作者针对脂质体开发了一种新的纯化蛋白冠的方法。使用PEG的抗体 (PEG-scFv) 作为配基来亲和性地吸附脂质体，从而将完整的蛋白冠分离出来。分离纯化方法更加温和，特异性也得到提高。
实验方法
作者在第一步中，使用薄膜分散法制备脂质膜：将一定质量的 PEG-PCL 共聚物样品置于玻璃容量瓶中并以 0.03% (m/v) 溶解在氯仿中。 有机溶剂会通过旋转蒸发仪挥发在瓶底形成一个薄薄的脂质膜，然后进行真空干燥3 小时以除去痕量的氯仿。随后，通过原核表达系统 E.coli重组表达抗体片段PEG-scFv。由于具有His标签，细菌破碎上清使用Ni-NTA亲和层析进行抗体的捕获。
为了捕获分离体外脂质体，作者将脂质体分别与PEG-scFv、小鼠血浆体外37℃孵育1h。然后，使用Ni-NTA填料-重力柱纯化具有蛋白冠的脂质体。而对于体内脂质体的捕获分离，作者将注射了脂质体小鼠的血浆与PEG-scFv孵育，然后，使用Ni-NTA填料-重力柱纯化具有蛋白冠的脂质体。最后，作者使用多种检测手段对脂质体进行表征，包括，LC-MS/MS、SDS-PAGE等等。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 填料 | 17371201 | Ni Sepharose excel | 25 ml |
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