作者：Lin Jin et al.
发表日期：2018年2月
发表期刊：Journal of Visualized Experiments

研究背景

脂质体 (liposome) 是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25~1000 nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。生物学定义：当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时，分子的疏水尾部倾向于聚集在一起，避开水相，而亲水头部暴露在水相，形成具有双分子层结构的的封闭囊泡，称为脂质体。

含脂肪酸这种单链两亲物的脂质体，相较于含二酰基磷脂的脂质体有着显著不同的特性。这是由两亲物独特的化学特性决定的，特别是含脂肪酸的脂质体，其可溶性会增强。相似地，含游离脂肪酸的脂质体对盐和二价阳离子更敏感，原因在于羧酸头部基团和金属离子之间较强的相互作用。

本研究阐明了含部分或完整的单链两亲物 (如油酸) 的脂质体的制备、纯化和应用。

实验方法

1. 脂质体粗提液的制备
   首先制备脂质双分子薄膜，然后准备含5 mM钙黄绿素的250 mM Tris-HCl pH 8.0水化缓冲液，将上述水化液转移到制备好的薄膜上，制作囊泡，随后用100 nm的聚碳酸脂膜进行脂质体挤出，制备脂质体粗液。
2. 脂质体的纯化
   将上一步聚碳酸脂膜挤出得到的脂质体，用Sepharose 4B进行脂质体的纯化，所用流动相为250 mM tris-HCl pH 8。在此过程中未包封的溶质分子量较小，出峰较晚，而包封好的脂质体分子量较大，先出峰。用96孔板逐管收集分离后的组分，进行后续的表征。
3. 脂质体荧光表征
   用荧光法对制得的脂质体进行表征，将收集好的96孔板直接用于荧光表征，读取荧光值。

产品信息

Reference
Jin L, Engelhart AE, Adamala KP, Szostak JW. Preparation, Purification, and Use of Fatty Acid-containing Liposomes. J Vis Exp. 2018 Feb 9;(132):57324.