作者:Li Cui et al.
发表日期:2019年3月
发表期刊:Biological Macromolecules
研究背景
黄芩(Baicalensis Georgi)是中药黄芪汤的御用药材,在中国被广泛用于治疗多种疾病,尤其是胃肠道炎症。
黄酮和多糖是黄芩的重要有效成分。黄酮类化合物黄芪苷已被证实可改善结肠炎症状。多糖对结肠炎的作用从未被研究过。基于其他多糖对结肠炎的保护作用,推测黄芩多糖可能对结肠炎具有预防和治疗作用。为了证明这一假设,本篇探讨了黄芩多糖对DSS和LPS刺激的THP-1源性巨噬细胞诱导的急性结肠炎小鼠模型的保护作用及其潜在机制。
本篇先采用水提醇沉法精制多糖,然后经过离子交换层析初纯和凝胶过滤分子筛精纯后,得到纯度较高的多糖组分SP1-1,其糖含量为72.64%,不含蛋白质。后经研究表明,SP1-1显著减弱了DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。
实验方法
将黄芩(400 g)研磨成细粉,在室温下浸入石油醚(60°C–90°C)中过夜。通过过滤收集固体残余物,并重复该过程两次以脱脂。
预处理后的样品用水提取,水提取液加乙醇至终浓度为80% (V/V),在4°C下放置24 h,进行沉淀。然后,通过过滤除去上清液,将获得的粗制黄芩多糖重新溶解在水中,并使用Sevage法去除蛋白质5次,收集上清液并真空干燥。
粗多糖用去离子水溶解,上DEAE-52离子交换柱(2.6 cm × 50 cm),用0.1,0.3,0.5和1.0 mol/L的NaCl分别以0.8 mL/min的流速洗脱。根据苯酚硫酸法定量的碳水化合物含量,合并得到的级分。
然后,在Sephadex G-100凝胶柱(1.6 cm × 60 cm)上用尺寸排阻色谱法进一步分离洗脱的样品,并用去离子水以0.2 mL/min的流速洗脱。收集级分,浓缩,透析并冷冻干燥,得到纯化的多糖(SP1-1)。然后将SP1储存在室温下的瓶干燥器中以供进一步研究。
纯化后的SP1-1多糖通过小鼠急性毒性实验,细胞毒性实验,结肠炎的诱发与药物治疗设计,ELISA法检测细胞因子等功能实验,证实了SP1-1显著减弱了DSS诱导的小鼠实验性结肠炎。SP1-1的作用机制涉及抑制NF-kB信号和NLRP3炎症小体激活,为其在结肠炎治疗中的潜在应用提供了一些证据。
产品信息
类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
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预装柱 | 28926982 | HiScreen Capto DEAE | 1 × 4.7 mL |
填料 | 17544310 | Capto DEAE | 25 mL |
空柱 | 28988950 | Column XK 26/70 | 26/70 |
填料 | 17006001 | Sephadex G-100 | 100g |
空柱 | 28988946 | Column XK 16/70 | 16/70 |