作者：Lu Feng et al.
发表日期：2022年3月
发表期刊：Molecules
研究背景
山茶属Camellia是山茶科中最大的属。茶花种子的蛋白质含量约为6%—8%。越南茶花的氨基酸组成约为17种人体必需的氨基酸。活性肽对人体具有重要的生理作用。本文旨在挖掘活性肽在酒精性肝损伤中的作用，揭示活性肽与酒精性肝损伤严重程度的关系。
实验方法
采用“碱溶酸沉”法提取油茶籽粕蛋白：
脱脂油茶籽粕→粉碎→碱提(NaOH)→离心(3000 r/min，20 min)→上清液→酸沉→离心(3000 r/min，20 min)→冷冻干燥→蛋白质
通过正交实验优化碱提工艺，仪蛋白提取率为指标确定最佳碱提条件为：料液比1 : 25，PH值10，浸提时间80 min，浸提温度45℃，粉碎粒度80目。通过实验验证，油茶籽粕蛋白的等电点为pH = 4.5，此时蛋白的沉淀量最大。
采用中性蛋白酶水解水解油茶籽粕蛋白：
油茶籽粕蛋白→粉碎→过80目筛→3% (w/v)悬浮液→热变性处理(90℃，20 min)→调节pH值→酶解→灭酶→离心(4000 r/min，15 min)→取上清液→树脂脱盐→离心(5000 r/min，15 min)→取上清液冷冻干燥→油茶籽多肽
最佳反应条件是:酶解温度46.8℃，酶解时间4.3 h，酶解pH = 7.2，底物浓度3.0%，加酶量8028.2 u/g底物。
用10、5、1 kDa的聚醚砜超滤膜对油茶籽多肽进行超滤分离。收集各组分并冻干，测定IC 50 值。选择最高的ACE抑制率。纯化具有最小IC 50 值的组分。本研究中ACE抑制率最高的组分为分子量小于1 kDa的渗透液，且冻干肽粉的IC 50 值最小，活性最高。
DEAE Sepharose FF离子交换柱分离纯化分子量小于1 kDa活性肽粗品：
将DEAE Sepharose FF填料装填在1.6 m*30 cm规格的层析柱中。用10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH = 8.0)平衡2 CV。超滤后干燥处理的活性肽粗品，溶于10 mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH = 8.0)中，并用0.45 µm滤膜过滤后上样。上样后，进行线性梯度洗脱(根据线性洗脱结果，梯度洗脱的NaCl的浓度为0.25—0.35 mol/M)，分离出两个组分A1和A2。其中A1组分具有更高的ACE抑制效率。
接着收集足够量的A1组分并冷冻干燥，以10 mg/mL的浓度溶解。用大孔树脂脱盐后，将每种样品10 mL上样到Sephadex G-100柱上。洗脱剂为蒸馏水，洗脱速度为1.0 mL/min。用Sephadex G-100凝胶分离后，得到三种不同的组分，即A1-1、A1-2和A1-3。通过测定组分A1-1、A1-2和A1-3的DPPH清除能力、OH清除能力、O2 清除能力和总抗氧化能力，评估各组分的抗氧化效果。结果表明，经过一系列的分离纯化，CMAPS的主要抗氧化成分都集中在A1-2中。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28936541 | HiPrep DEAE FF 16/10 | 1 × 20 mL |
| 填料 | 17070910 | DEAE Sepharose FF | 25 mL |
| 填料 | 17006001 | Sephadex G-100 | 100 g |
