作者：Caicheng Wang et al.
发表日期：2019年4月
发表期刊：Molecules
研究背景
苤蓝种子Brassica oleracea var. gongylodes浸泡后经过均质化离心得到组织裂解上清液，上清液经过不同分辨率的两步离子交换层析完成初纯和精纯，再流经适合分离多肽的分子筛得到纯度较高的抗菌多肽Brassica oleracea var. gongylodes Antifungal Peptide，BGAP。纯化后的多肽对常见的十几种植物真菌具有不同程度的抑制生长作用。通过平板生长的测试，发现纯化后的BGAP能够对烟草赤星病菌、贵腐霉菌、胶孢炭疽菌和玉米大斑病菌等12种植物真菌具有抑制生长作用，但是对细菌一般没有抑制生长的作用。
实验方法
150 g苤蓝种子用1 L的缓冲液(10 mM NH4OAc，pH = 4.6)浸泡过夜后进行均质化，然后继续4度孵育12 h，后10000g离心30 min取上清液，得到原始裂解液。
澄清的裂解液经过SP Sepharose离子交换层析初纯，层析柱型为5 cm × 16 cm，结合液10 mM NH4OAc buffer (pH = 4.6)，用结合液平衡层析柱后将用洗脱液10 mM NH4OAc buffer (pH = 4.6)和 0.2 mol/L，0.5 mol/L，1 mol/L NaCl分步洗脱。分离的组分经过抗真菌活性鉴定，目标抗菌多肽在0.5 mol/L NaCl洗脱下来。
澄清的裂解液经过SP Sepharose离子交换层析初纯，层析柱型为5 cm × 16 cm，结合液10 mM NH4OAc buffer (pH = 4.6)，用结合液平衡层析柱后将用洗脱液10 mM NH4OAc buffer (pH = 4.6)和 0.2 mol/L，0.5 mol/L，1 mol/L NaCl分步洗脱。分离的组分经过抗真菌活性鉴定，目标抗菌多肽在0.5 mol/L NaCl洗脱下来。
经过两步离子交换层析纯化的样品，最后利用Superdex peptide 10/300 分子筛精纯，抗菌活性的多肽在约进样后的14 mL流出。
纯化后的抗菌多肽经过质谱进行为分子量为6—10 kDa左右的多肽混合物。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28936544 | HiPrep SP FF 16/10 | 1 × 20 mL |
| 填料 | 17072910 | SP Sepharose FF | 25 mL |
| 空柱 | 28988952 | Column XK 50/20 | 50/20 |
| 预装柱 | 29275877 | Capto HiRes S | 1 × 1 mL |
| 预装柱 | 29219757 | Superdex 30 Increase 10/300 GL | 1 × 24 mL |
