作者：Hana Maalej et al.
发表日期：2020年12月
发表期刊：International Journal of Molecular Sciences
研究背景
根据生物多样性，海洋生物是巨大的生物化学活性物质的宝库，特别是碳水化合物酶类。和陆地生物的栖息环境不同，所以海洋生物酶的适合pH、温度和水解活力都有所不同。鱼等海洋生物内脏中具有大量可以消化鱼骨、甲壳、皮肤、贝壳等物质的酶，因此具有巨大的价值。
比如蛋白酶、淀粉酶，是一种GH13糖苷水解酶，它占据了全球酶市场的30%份额，可以将高聚糖水解成麦芽糊精、麦芽糖和葡萄糖。淀粉酶的工业应用非常广，如淀粉的液化和糖化，烘培、消化辅助、洗涤、纺织、造纸、酿酒、蒸馏、制药工业等。
因此，寻找高活力的淀粉酶可以为工业降低成本，利用海洋生物内脏提取酶也可以废物利用提高产品的附加值。基于蓝蟹的繁殖量大以及生物链的平衡，希望从它体内开发可以提高燕麦面粉抗氧化能力的淀粉酶。
实验方法
提取蓝蟹内脏进行前处理，获取粗提物。
使用超滤进行第一道粗纯，cut-off分子量10 kDa，提高4.71倍比活和85%回收率。
浓缩后上到Sephadex G-100分子筛进行中度纯化，使用25 mM Tris-HCl buffer (buffer A，pH 8.0包含0.5‰ Triton X-100)。纯化倍数提高31.12，回收率为49%。
按淀粉酶活力组分收集进行mono Q阴离子交换精纯，0-0.4 M NaCl洗脱液，流速1.25 mL/min，BCA α-Amylase 在220–260 mM NaCl中洗脱。
最终产品比活为1390.8 U/mg，纯化倍数424.02，回收率为27.8%。
此法相较于其他结合几种分子筛进行纯化的方法，其回收率高和纯化倍数都高出很多。对其温度和pH曲线进行测定，在30-70℃内可保持50%以上活力，最适酶活温度为50℃，80℃时酶活损失达到95%。最适pH范围为7-8，在pH 4-10范围内具有活力。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 29275881 | Capto HiRes Q 10/100 | 1 x 8 mL |
| 填料 | 17006001 | Sephadex G-100 | 100 g |
| 超滤管 | 28932360 | Vivaspin 20, MWCO 10 kDa | 12个 |
| 空柱 | 28988946 | Column XK 16/70 | 16/70 |
