作者：Baskaralingam Vaseeharan et al.
发表日期：2016年02月
发表期刊：Fish & Shellfish Immunology
研究背景
全球虾类养殖主要面临的严重问题来自于病原微生物和水产病毒的感染。了解动物的免疫机制可以很好的制定防治策略和采取有效的措施解决虾类病原菌感染的相关问题。
尽管虾类没有适应免疫系统，但它们的固有免疫系统却可以很好的保护自身免受微生物的侵害。虾类的非特异免疫系统分为两部分，体液免疫和细胞免疫。细胞免疫由血细胞调节，而体液免疫由血淋巴控制。这其中包括刚性的外骨架免受微生物入侵，血块的形成和通过激活酚氧化酶原形成黑化作用。酚氧化酶原激活系统是无脊椎动物免疫调节的重要部分，酚氧化酶参与催化形成黑色素，使单酚形成邻苯二酚，进一步催化形成联苯酚和醌，最终形成不可溶的黑色素。
纯化的酚氧化酶具有血细胞凝集、酵母凝集、吞噬、包装和抗生物膜的作用。
实验方法
收集获得实验原材料：
从当地渔民处获得新鲜捕捞的青虎对虾，用海水洗净浮游生物带回实验室喂养三天。用注射器抽取虾腹底静脉血淋巴。加入抗凝血剂低温离心处理，分离得到上清。
纯化步骤：
低温离心获得细胞沉淀，使用Tris-HCl缓冲液清洗和重选细胞，获得ProPO粗提物。用同样的Tris-HCl缓冲液平衡Blue Sepharose层析柱，ProPO样品上到柱子上，使用1 mL/min的流速进行柱清洗，ProPO作为未结合蛋白被洗出，其他杂质挂在Blue Sepharose柱上，对洗杂液收集，测浓度和测活性。
纯化后的ProPO使用SDS-PAGE进行纯度分析和分子量检测，再分别用XRD、RP-HPLC、CD、FTIR等方法进行理化性质分析和鉴定。
然后使用梯度SDS-PAGE和邻苯二酚对ProPo进行分离、染色和胶回收，重溶后进行抗生物膜等性质的测试。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28978243 | HiScreen Blue Sepharose FF | 1 x 4.7 mL |
| 填料 | 17544801 | Capto Blue | 25 mL |
| 空柱 | 28988946 | Column XK 16/70 | 16/70 |
