作者：Yuxiang Liu et al.
发表日期：2022年4月
发表期刊：J. Biol. Chem.
研究背景
AMPK激酶和AMPK相关激酶salt-inducible kinase，SIK3参与调节从代谢到睡眠等多种重要的生物活动，AMPK激酶能够感受AMP/ATP比例来调节能量稳态，还能够感受到肌醇inositol，参与能量平衡和细胞自噬，哺乳动物细胞的AMPK含有αβγ的三亚基异源复合物，α亚基是酶活中心亚基βγ是调节亚基，AMPKα2酶活受到位点T172、AMPKα1酶活受到T183磷酸化的调控。研究已知Liver kinase B1，LKB1能够磷酸化和激活AMPK和SIK。将HEK细胞裂解液上清分别通过Q、SP、Heparin、Superdex 75分子筛，将收集的组份分离后分别去做体外的磷酸化实验，发现了存在不依赖于LKB1的SIK3-T221磷酸化活性。通过功能成分的富集纯化，鉴定出了激酶mammalian sterile 20–like kinase 3，MST3。体内和体外实验都证明了MST3可以直接将AMPK和SIK磷酸化。将外源表达的MST3、MST3b (人脑的MST3) 和mMST3 (小鼠的MST3) 在体外测定SIK1、2、3酶的磷酸化能力，通过SIK1、2、3的突变体，确定SIK1、2、3的磷酸化位点为SIK1-T182，SIK2-T175、SIK3-T221。在体外测定AMPKα1和AMPKα2酶的磷酸化能力，通过AMPKα的突变体，确定AMPKα1的磷酸化位点为AMPKα1-T183和AMPKα2-T172。MST3对AMPK和SIK的磷酸化作用增强了AMPK下游信号蛋白ACC1和SIK下游信号蛋白HDAC4的磷酸化。
实验方法
将50 L的HEK细胞的裂解液上清，经过SP，Heparin，Q，HAP，Superdex 75，Mono S几步层析分离收集的样品，经过体外的SIK3磷酸化酶活测定，最终分离的活性组分根据质谱鉴定含MST3，MST4，PANK1，STK39，FES，ADCK2，将这几个蛋白外源表达后，分别进行体外活性测定，最终确定MST3和MST4具有磷酸化SIK3的活性。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17115201 | HiTrap SP HP | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 17040703 | HiTrap Heparin HP | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 17115401 | HiTrap Q HP | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 29148721 | Superdex 75 Increase 10/300 GL | 1 × 24 mL |
| 预装柱 | 29275877 | Capto HiRes S 5/50 | 1 × 1 mL |
