作者：郁建锋 等
发表日期：2016年11月
发表期刊：中国畜牧兽医
研究背景
随着分子生物学、免疫学理论和技术的发展 ，运用重组表达技术来生产预防和治疗疾病的药品已成为近几年研究的热点，动物细胞因子的基因克隆及其在畜牧兽医上的应用和对疾病的治疗，特别是有关IFN、IL、TNF、GM-CSF 等几种细胞因子的研究进展迅速，应用前景非常广泛。
2017年共有63个国家和地区发生了H5/H7禽流感，已成为一个世界性的问题和威胁。变异的H7N9对家禽具有很大的潜在威胁性，兽药疫苗防控变得必须。
2018年，国家一类新兽药重组鸡白细胞介素-2上市发布会。白细胞介素-2能活化T细胞，促进B细胞分化，降低炎症反应，增强机体表面抗应激和抗感染能力，免疫增效。在家禽传支、流感、鼻炎等疫苗免疫的同时应用，可降低疫苗免疫反应并获得更为确切的免疫效果，提前产生免疫效力，提高抗体水平，保证更安全的免疫。
鸡生长激素cGH (Growth Hormone)在毕赤酵母GS115中表达，筛选高拷贝菌株，分泌表达上清经过镍柱亲和捕获+凝胶过滤精细纯化两步纯化后，分别去除宿主杂质、培养杂质和聚集体后，目的蛋白纯度达到95%以上，最终计算重组蛋白的得率在10 mg/mL以上。
实验方法
取100 mL诱导培养上清，于镍柱的平衡液中进行透析18 小时，每6小时换液一次，透析样品经10000 rpm/min离心处理取上清，并用0.2 μm滤膜过滤样品。
首先，使用HisTrap HP高分辨率镍柱进行样品的捕获和粗纯。平衡镍柱10个CV后，以0.5 mL/min流速上样，再分别用50 mmol/L咪唑和100 mmol/L咪唑的缓冲液进行10个CV洗杂，除去非特异性结合的蛋白，最后用500 mmol/L咪唑洗脱液将目标蛋白洗脱，收集洗脱峰。
然后，采用HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR凝胶过滤柱进行精细纯化。使用pH 7.2 PBS缓冲液，以流速0.5 mL/min进行分子筛的柱平衡，平衡1 CV后，将前一步收集的洗脱样品上样，样品体积小于4 mL，以同样流速进行洗脱，收集洗脱峰。
使用SDS-PAGE法分析纯化后蛋白的纯度，BSA法测定鸡生长激素cGH的蛋白浓度，并计算回收率。
后续实时荧光定量检测实验证明，经过纯化的鸡生长激素cGH可刺激鸡肝癌细胞LMH内的胰岛素样生长因子IGF-I基因的mRNA表达上调，且在一定的剂量范围内与重组蛋白呈现剂量效应。说明重组鸡生长激素具有生物学活性，为其结构和功能的研究及生产应用奠定了基础。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17524801 | HisTrap HP | 1 × 5 mL |
| 填料 | 17526801 | Ni Sepharose HP | 25 mL |
| 预装柱 | 17116501 | HiPrep 16/60 Sephacryl S-100 HR | 1 × 120 mL |
| 填料 | 17061210 | Sephacryl S-100 HR | 150 mL |
