作者：S. Barathiraja et al.
发表日期：2017年12月
发表期刊：Protein Expression and Purification
研究背景
干扰素IFNs是抵御病毒感染的第一道防线，他们通常可以用来作为控制病毒侵染的生物治疗手段。
干扰素λ3 (IFNλ3)也称为IL28B ，是III 型干扰素的一员，其结构和遗传基因与I型干扰素很不同。IFNλ作为III型干扰素也具有激活JAK-STAT途径，刺激ISGs表达上调的功能。
这些干扰素还具有抗肿瘤和免疫调节的作用。III型干扰素家族由IFNλ1 (IL29), IFNλ2 (IL28A), IFNλ3 (IL28B) 和近期报道的人类的IFNλ4组成。
科学家已对人类和小鼠的IFNλ3有了深入研究，但对牛的IFNλ3却少有报道，除了少量在腺病毒系统中表达的报道以外。
为了预防牛等牲畜被病毒感染疾病，需要IFNλ3等特异的生物制剂在饲养初期的加入作为抗病毒的防治药，终极目标是利用IFNλ3的抗病毒活性来防治牛的接触性传染疾病，例如口蹄疫(FMDV)等。
实验方法
将来自牛的IFNλ3基因在Pichia pastoris (GS115菌株)表达体系中表达，构建重组质粒pPICZαA-IFNλ3将IFNλ3分泌到培养上清中，利用0.5% 甲醇诱导表达。
培养上清用60% w/v 饱和硫酸铵于4°C沉淀4h，沉淀溶解于1 × PBS 缓冲液中并于4°C透析于1 × PBS 缓冲液中过夜，SDS-PAGE法和Bradford法检测并计算蛋白得率，目标蛋白分子量约为19 kDa。
牛干扰素IFNλ3纯化方法：
将样品透析于pH = 4.2，0.1 M柠檬酸盐缓冲液中，用同样的缓冲液平衡阳离子交换柱子SP Sepharose FF, 将样品上到柱子上，分别采用0.5 M, 1.0 M 和1.5 M氯化钠进行步级洗脱。
全部步骤包括平衡、洗杂和洗脱都使用15 mL/h的流速，并在 4°C完成全部操作，过程中使用UV280检测蛋白的吸收值。
样品由1.5 M氯化钠洗脱出，1 M和0.5 M氯化钠没有明显条带。
纯化后的样品使用小鼠IFNλ3抗体进行WB免疫印迹法检测，确定目标蛋白后，用β-actin基因作为管家基因，采用qPCR法进行活性检测。qPCR 结果显示，重组牛干扰素IFNλ3对全部三个 ISGs (Mx 蛋白基因, PKR基因, OAS 编码基因)都具有刺激表达的效果， 诱导水平不同，其中PKR基因表达13倍，Mx蛋白基因诱导表达4.5倍，OAS基因表达2倍。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17505401 | HiTrap SP FF | 5 × 1 mL |
| 填料 | 17072910 | SP Sepharose FF | 25 mL |
