作者：Fang Yang et al.
发表日期：2015年07月
发表期刊：Protein Expression and Purification
研究背景
当前，家庭养犬日益普遍，但是动物携带一些病原体，尤其是病毒的现象也越发严重。例如：犬细小病毒会对犬造成致命的疾病。
犬干扰素具有一定抗病毒活性，已广泛的在临床应用于对抗犬细小病毒的大范围感染，作为免疫调节药的辅助药。因此，犬干扰素CaIFNα在犬类饲养中具有巨大的对抗犬体内疾病的潜力。
犬干扰素IFN分成两种：I型和II型。I型干扰素在发生病毒感染时会产生出很大量，作为内部免疫和适应免疫反应的一个关键的桥梁，用于机体的免疫应答，发挥抗病毒活力和刺激免疫的功能，例如促进抗原呈递细胞的成熟和调节T细胞应答。
犬干扰素CaIFNα作为一个优秀的药物，用于对抗犬类的多种病毒疾病。
实验方法
实验中CaIFNα融合三种不同的标签，在E.Coli中进行优化表达：分别为thioredoxin (Trx)，glutathione S-transferase (GST)，和NusA (Nus)。其中Trx-CaIFNα 和GST-CaIFNα融合蛋白表达形成包涵体，Nus-CaIFNα在低温下诱导表达形成可溶态。Trx-CaIFNα进行包涵体纯化并复性及重折叠，Nus-CaIFNα在天然状态下纯化。
- Nus-CaIFNα纯化方法：
E.Coli体系，使用1 mM IPTG于25℃诱导表达12 h，收获细胞，重悬于0.5 M NaCl，20 mM Tris-HCl pH = 8.0 buffer。
样品上清加载在5 mL HisTrap FF柱上，分别采用80，100，150，200，300和1000 mM咪唑进行步级洗脱，每步洗脱2 CV。 - Trx-CaIFNα纯化方法:
E.Coli体系，使用1 mM IPTG于37°C 诱导表达12 h，收获细胞，0.1% v/v lysozyme, 1 mM EDTA, 0.4% v/v Triton X-100，20 mM Tris-HCl pH = 6.5 buffer中。
包涵体使用8 M urea, 2 mM β-mercaptoethanol，20 mM Tris-HCl pH = 8.0溶液溶解2 h。
样品上清加载在5 mL HisTrap FF柱上，分别采用10, 50，100和200 mM咪唑进行步级洗脱，每步洗脱2CV。
对比三种标签重组蛋白构建方式， Nus-CaIFNα在18℃和25℃表达溶解性最高。
纯化后经BSA法测定总蛋白与回收率，SDS-PAGE法测定纯度：Trx-CaIFNα和Nus-CaIFNα纯度＞ 90%，回收率分别为74.8%和6.5%。
进行体外抗病毒实验，Trx-CaIFNα和Nus-CaIFNα活力分别可达1.09 ± 0.47 × 1014 U/mol 和2.25 ± 0.87 × 1012 U/mol。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17525501 | HisTrap FF | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17531806 | Ni Sepharose 6 FF | 5 mL |
| 预装柱 | 17513102 | GSTrap FF | 5 x 5 mL |
