作者：Sweta Karan et al.
发表日期：2017年12月
发表期刊：Journal of Immunology Research
研究背景
白细胞介素10是一种主要的细胞因子，也是很重要的机体固有免疫系统和适应免疫系统的调节素。机体固有免疫与适应适应免疫系统被一些信号分子紧密掌管在一起，这些分子包括细胞因子、转录因子和一些机体固有受体等。
印度主要鲤鱼属——南亚野鲮鱼的IL-10鲜少有相关报道，其性质也未被研究。机体固有免疫与适应免疫系统尚未应用在鱼类免疫的范畴之内。
IL-10可从多种不同的细胞中产生，如T细胞、B细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞、角质细胞、单核细胞、巨噬细胞、NK细胞、肿瘤细胞等。人和多种动物来源的IL-10基因已经被广泛的研究与报道，例如：小鼠、鸡、宽吻海豚、北京鸭、火鸡、石斑鱼、草鱼、斑马鱼、鲤鱼、金鱼、 虹鳟鱼等等。
印度南亚野鲮鱼属于鲤鱼科属，是印度大陆最主要并大受欢迎的商业化鱼类。水产品含有丰富的微量元素和优质的动物蛋白。水产业要尽可能的避免环境和卫生条件所带来的负面影响，据报道感染鱼类的一些病原菌与革兰氏阴性菌相协同作用。在疾病感染的初期阶段加入一定水平的细胞因子对鱼类免疫抑制和抵御疾病起着关键作用。因为鱼类现遭遇越来越多的细菌与病毒感染，为避免渔业的经济损失，理解鱼类的免疫机理和细胞因子药物的作用机制对鱼类疾病防治是至关重要的。
实验方法
在大肠杆菌中构建C端含6 x his标签的南亚野鲮鱼rLrIL-10重组质粒，IPTG诱导表达5小时后，收集细胞重悬于10 mM Tris-HCl, pH 7.0, 0.5 M arginine溶液中，超声破碎细胞，SDS-PAGE考染法分析可溶蛋白和包涵体含量。
南亚野鲮鱼rLrIL-10纯化方法：
为防止超声溶液中的arginine对后续亲和实验产生影响，先使用PD-10重力脱盐柱对样品进行缓冲液置换。
可溶蛋白部分使用Co柱进行亲和纯化。Co离子的离子半径略大于Ni离子，对his标签的亲和力稍弱，但是对标签蛋白的纯化纯度相较于Ni柱有一点优势。样品的结合缓冲液为10 mM Tris-HCl, pH 8.0,10 mM imidazole，洗脱液为10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM Imidazole。
亲和纯化后的样品进行3.5 kDa cut-off，10 mM Tris-HCl, pH 7.0的透析和浓缩。
经电泳检测rLrIL-10的单体和二聚体分别为18 kDa和36 kDa，添加Arginine在超声破碎阶段可提高可溶性蛋白的含量，纯化后的样品LPS含量为0.015 pg/𝜇g，在LPS允许限制以内。
NBT法对rLrIL-10免疫活性进行检测，相比于对照组，对5个不同外周血细胞样品存在明显的外围吞噬细胞活性的抑制。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17085101 | PD-10 Desalting Columns | 30 × 2.5 mL |
| 预装柱 | 28953767 | HiTrap TALON crude | 5 × 5 mL |
| 填料 | 28957499 | TALON Superflow | 10 mL |
