作者：Richard C. Laughlin et al.
发表日期：2019年02月
发表期刊：Plant Biotechnology Journal
研究背景
经典猪瘟病毒(CSFV)引起经典猪瘟，这是一种高度传染性的出血热，影响野生和家养猪。欧洲、亚洲、非洲和南美洲暴发的猪瘟疫情对动物健康、食品安全和养猪业产生了重大影响。通过进口限制(例如禁止进口活猪和猪肉产品)、地方性疫苗接种计划和往往以很高成本扑杀受感染或有风险的动物，预防接触该病通常得到控制。
目前猪瘟病毒修饰的活病毒疫苗具有保护作用，但不能区分受感染动物与接种动物(DIVA)，这是疾病监测规划的一个关键方面。或者，使用病毒蛋白E2的第一代亚单位疫苗可用于DIVA诊断试验，但缓慢地诱导保护性反应，对垂直传播提供有限的预防，并可能无法阻止病毒脱落。
从杆状病毒/昆虫细胞系统研制的猪瘟E2亚单位疫苗已在欧洲和亚洲开展了多次疫苗接种活动。然而，这种表达系统被认为是昂贵的兽医疫苗，并不是理想的广泛部署。
为了解决可扩展性、生产成本和免疫原性等问题，我们在本生烟中使用了农杆菌介导的瞬时表达平台，并在新型水包油乳剂中配制了纯化抗原。我们报道了猪瘟E2亚单位疫苗的生产。该疫苗对受到攻击的猪具有完全的保护作用，即使在单次接种后也伴有强烈的病毒中和抗体反应。
实验方法
样品处理：
植物源性E2抗原来源于本氏氮芥植物，在渗透后7-8天(DPI)，收获植物，用冷缓冲液(50 mM磷酸钠，150 mM氯化钠，70 mM抗恶劣血酸，5 mM EDTA, pH 8.0)匀浆，低温下14 000 g离心15分钟。pH调至4.8，2 M醋酸沉淀蛋白。提取液的pH调至pH 7-8，低温下14 000 g离心15分钟，过滤澄清。
纯化：
E2-StrepII抗原纯化，将提取物装入5 mL StrepTrap HP柱。
无标签的E2抗原纯化，将抗E2抗体WH303 偶联于HiTrap NHS-Activated HP Sepharose柱上，再将澄清的提取液上到柱上进行免疫亲和，E2从柱上用100 mM柠檬酸5CV洗脱。洗脱组分用1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)透析，pH 7.4, 4℃过夜。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 29401322 | StrepTrap XT | 1 × 5 mL |
| 填料 | 29401324 | Strep-Tactin XT Sepharose | 10 mL |
| 预装柱 | 17071701 | HiTrap NHS-Activated HP | 1 × 5 mL |
| 填料 | 90100400 | NHS-ACT Sepharose High Performance | 100 mL |
