作者：Yaozhong Hu, Ying Sun et al.
发表日期：2021年3月
发表期刊：Food Chemistry
研究背景
食物直接和间接被污染病原体后大大增加了人体感染机率，严重危害人类健康。其中金黄色葡萄球菌S. aureus 就是一种重要的病原体，食品和相关产品被强制要求检测S. aureus菌落数。常用检测手段包括平板计数法，PCR法，外毒素免疫法等，这些方法具有一定的局限性。文献研究和开发出基于直接针对灭活菌体的纳米抗体（Nanobody, Nb）的免疫检测方法。通过ELISA筛选出不与IgG的Fc片段发生相互作用的菌株ATCC10832，利用优化的终浓度为 0.5% (v/v)甲醛灭活后的菌体配合佐剂免疫羊驼7次，通过采血50mL提取外周血淋巴细胞建立Nb库。然后通过噬菌体展示的方法，筛选出对S. Aureus菌体特异性识别的Nb共四个（Nb85、Nb119、Nb147、Nb174）并测序。通过原核细胞诱导表达His标签和生物素标签的Nb，然后利用亲和层析和凝胶过滤分子筛两步层析纯化出Nb抗体，分子量约15 kD。并用thermofluor assay测试稳定性、ELISA鉴定Nb对S. Aureus菌体识别的特异性。以此开发出了双夹心ELISA检测技术，利用His-Nb包被酶标板捕获、biotinylated Nb来检测样品中的S. aureus菌体，经测试得到 检测LOD为1.4×105 CFU/mL，并能够从牛奶中检测出10 CFU/mL/8h的S. aureus菌体，证明此法能够高效的从食品中检测出S. Aureus，为后续的产业转化提供研究基础。
实验方法
转化了Nb基因的大肠杆菌在28度IPTG诱导表达16 h后，离心收集的菌体经过渗透休克法osmotic shock得到周质提取液，His标签的Nb第一步层析通过IMAC捕获和洗脱，生物素修饰的Nb第一步层析通过Streptavidin捕获和洗脱，第二步均为Superdex 75 凝胶过滤层析分离聚集体和单体，并对样品换液，主峰约在85 mL，分子量约为15 kD左右。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17092003 | HiTrap IMAC HP | 5×1 mL |
| 预装柱 | 17511201 | HiTrap Streptavidin HP | 5×1 mL |
| 预装柱 | 29148721 | Superdex 75 Increase 10/300 GL | 24 mL |
