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表皮生长因子受体特异的单域抗体-肿瘤坏死因子α融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达

作者：Tomohiro Osaki et al.
发表日期：2018年2月
发表期刊：Monoclon Antib Immunodiagn Immunother.

研究背景

肿瘤靶向的抗体-细胞因子融合蛋白，称为免疫细胞因子，有望成为开发有效抗肿瘤治疗剂的有用平台。然而，它们的设计和低成本生产仍然是挑战。在这项研究中，我们构建了包含单域抗体Ia1的抗体-细胞因子融合蛋白 (Ia1-TNFα)，该抗体靶向在上皮肿瘤中过表达的表皮生长因子受体 (EGFR)和肿瘤坏死因子α (TNFα) 域，具有抗肿瘤活性。通过使用大肠杆菌表达系统以可溶形式产生Ia1-TNFα，并且在对培养上清液进行亲和纯化后，获得约2 mg/ L的细胞培养物。凝胶过滤分析表明，Ia1-TNFα主要以三聚体形式存在，这与TNFα的多聚态一致。流式细胞仪分析显示，Ia1-TNFα与表达EGFR的肿瘤细胞特异性结合，并且其结合活性高于单价Ia1，表明融合蛋白与肿瘤细胞多价结合。

实验方法

采用His标签纯化重组表达的Ia1，sdAb，此步采用的填料TALON Metal Affinity填料。TNFα采用的纯化方式为离子交换层析结合凝胶过滤层析，所使用到的层析柱分别为HiTrap Q XL、Superdex 75 16/600和RESOURCE S。在Ia1-TNFα融合蛋白的纯化策略中首先使用80%饱和硫酸铵沉淀法去除上清，将沉淀重新溶解到PBS缓冲液中之后使用TALON亲和一步纯化拿到融合的目标蛋白，后进行SDS-PAGE和凝胶过滤层析检测纯度，并使用流式细胞术对相关的结合特性进行表征。

产品信息

类别 货号 产品名称 规格
预装柱 17524802 HisTrap HP 5 × 5 mL
预装柱 28989333 HiLoad 16/600 Superdex 75 pg 1 × 120 mL
预装柱 28990944 Superdex 200 Increase 10/300 GL 1 × 24 mL
预装柱 17515901 HiTrap Q XL 5 × 5 mL
预装柱 28953767 HiTrap TALON crude 5 × 5 mL
填料 17526801 Ni Sepahrose HP 25 mL
填料 17104401 Superdex 75 pg 150 mL
空柱 28988937 Column XK 16/20 16/ 20
空柱 28988946 Column XK 16/70 16/ 70

Reference
Osaki T, Nakanishi T, Aoki M, Omizu T, Nishiura D, Kitamura M. Soluble Expression in Escherichia coli of a Single-Domain Antibody-Tumor Necrosis Factor α Fusion Protein Specific for Epidermal Growth Factor Receptor. Monoclon Antib Immunodiagn Immunother. 2018 Feb;37(1):20-25. doi: 10.1089/mab.2017.0051. PMID: 29474158.