作者：James S. Terry et al.
发表日期：2021年1月
发表期刊：Virology
研究背景
为了对抗 COVID-19，迫切需要开发专门针对 COVID-19 病原体 SARS-Coronavirus-2 (SARS-CoV-2) 的关键成分的抗体。 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白对病毒复制至关重要，是病毒颗粒组装不可或缺的一部分，也是感染和免疫保护的主要诊断标志物。目前，针对核衣壳蛋白的有限可用抗体试剂对 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白没有特异性，并且这些抗体的序列尚未公开。在这项工作中，作者开发并筛选了一系列针对 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白的新型小鼠单克隆抗体。总体而言，这些新的抗体将在对抗 COVID-19 的斗争中具有重要价值。
本文研究的 mBG86 抗体已在多种诊断和研究分析中选择并验证了对 SARS-CoV-2 核衣壳蛋白的高度特异性。其他五个选定的杂交瘤克隆（mBG 17、21、22、57 和 67）均显示出针对 SARS-CoV-2 N 蛋白的活性，对 SARS-CoV 和 HuCoV-NL63 的交叉反应较小。这些抗体将用于可以控制细胞培养和模式生物感染的实验室研究。特定的 mBG86 抗体可以在未来用于 COVID 患者的快速、准确和廉价的诊断分析。
实验方法
首先进行表达载体的构建，不同长度的片段在大肠杆菌中进行表达。
作者主要使用亲和和凝胶过滤的方式进行抗原片段的纯化，之后将其打入小鼠体内进行免疫反应，之再进行一系列的验证和筛选工作，最终确定了几个有效的抗体。
该纯化的具体路线如下：第一步，亲和层析，使用Ni+柱进行快速和大量捕获。第二步，凝胶过滤层析进行精纯，使用HiLoad 16/600 Superdex 200 pg柱子，平衡缓冲液使用25 mM HEPES ，pH 7.5。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17531901 | HisTrap FF | 5 × 1 mL |
| 填料 | 17531801 | Ni Sepharose 6 FF | 25 mL |
| 预装柱 | 28989335 | HiLoad 16/600 Superdex 200 pg | 1 × 120 mL |
| 填料 | 17104301 | Superdex 200 pg | 150 mL |
