作者：A .Y.-H. TEH et al.
发表日期：2021年1月
发表期刊：GUT MICROBES

研究背景

产肠毒素大肠杆菌 (ETEC) 会导致严重腹泻，在一些国家（LMICs）中，ETEC 是幼儿死亡的主要原因，估计 5 岁以下儿童的死亡率为 300-500,000。 ETEC 也会导致每年大约 1000 万的旅行者腹泻。 系统评价表明30-40% 的旅客可检测到 ETEC腹泻，特别是在流行地区。ETEC 通过受污染的水或食物经口粪途径传播。

目前还没有针对ETEC的商业化产品。因为该疫苗开发具有挑战性，源于抗原多样性。

在这项研究中，作者通过研究单克隆抗 ETEC CfaE 分泌型 IgA 抗体在本氏烟草植物中的表达，以期促进获得 ETEC 被动免疫治疗。虽然抗体产量和纯化需要优化，但抗 ETEC在低成本工厂平台上生产的 SIgA 抗体在功能上与 CHO 相当，并为 LMICs 的被动免疫治疗提供了希望。

实验方法

作者首先进行表达载体的构建，之后进行植物浸染，6天后取叶片，用 3 倍体积的 PBS (pH 8.0)与 0.1% Tween 2制备纯化样本。在捕获阶段，使用Capto L 亲和填料，洗脱液使用0.1 M 甘氨酸-HCl (pH2.7)，洗涤后，用 1 M Tris-HCl (pH9.0) 中和。之后抗体用 PBS 0.01% Tween 20 透析并使用 Amicon Ultra-15进行浓缩。对于CHO 细胞表达的68-61 SIgA and dIgA抗体，还需要过HiLoad 26/600 Superdex 200pg柱子精纯。

该纯化过程具体如下：

1. 第一步，载体构建及植物侵染扩大，叶片研磨后制备纯化样品。
2. 第二步，亲和纯化，使用Capto L 亲和捕获。
3. 第三步, 凝胶过滤纯化，使用HiLoad 26/600 Superdex 200pg柱子进行精纯。

产品信息

Reference
A .Y.-H. TEH et al.Investigation of a monoclonal antibody against enterotoxigenic Escherichia coli, expressed as secretory IgA1 and IgA2 in plants, 2021, VOL.13, NO. 1