作者：YuBei Jin, et al.
发表日期：2017年5月
发表期刊：Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry
研究背景
RAG1/2基因编码催化Ig (免疫球蛋白)和TCR (T 细胞)的V (D)J重组的酶受体，从而产生B和T细胞初级免疫库的多样性。RAG基因在初级淋巴器官中表达，在成熟淋巴细胞中不表达，是未成熟B和T淋巴细胞分化所必需的。大肠杆菌是用于重组蛋白生产的主要细菌。它具有明确的遗传背景，培养简单，转化和转导效率高，生长快，成本低，可快速大规模生产目标蛋白。人和兔的RAG2抗体目前已有市售，但猪RAG抗体至今仍不可用。
在这项研究中，合成了猪RAG2基因序列并在大肠杆菌中成功表达，并通过Ni柱层析纯化。纯化蛋白质后用来免疫兔子，收集血清，纯化了兔抗pRAG2多克隆抗体，证明了其识别人RAG2的能力，这项研究的结果为检测肠道相关淋巴组织中B细胞发育和验证B细胞发育部位提供了一种潜在工具。
实验方法
大肠杆菌表达猪的RAG2蛋白，收获细菌培养液后超声破碎，离心并收集上清液。将上清液上样到Histrap HP亲和柱，用10 mL结合缓冲液 (8 mM Na3PO4•12 H2O, 20 mM咪唑, 200 mM NaCl, pH 7.4)平衡。用15 mL结合缓冲液洗涤柱洗杂后，用5 mL洗脱缓冲液 (8 mM Na3PO4•12 H2O, 200 mM咪唑, 200 mM NaCl, pH 7.4)洗脱蛋白，收集并用SDS-PAGE分析洗脱液。PBS溶解洗脱蛋白RAG2，并在4℃下与TEV蛋白酶孵育过夜后切割。使用His-trap HP亲和柱纯化消化产物后得到pRAG2重组蛋白。
用制备的pRAG2蛋白与完全弗氏佐剂免疫兔子，从实验兔的心脏中收集血液，离心后使用rProtein A Sepharose层析柱得到纯化后兔抗pRAG2多克隆抗体。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17524802 | HisTrap HP | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17127902 | rProtein A Sepharose FF | 25 mL |
| 填料 | 17526801 | Ni Sepharose HP | 25 mL |
| 填料 | 17549801 | MabSelect PrismA | 25 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
