作者：Bo Hu et al.
发表日期：2020年2月
发表期刊：Journal of Ethnopharmacology
研究背景
水蛭蚂蟥Leech Whitmania pigra作为中药材，有一定的抗凝、清淤，疏通血管的作用，对冠状动脉粥样硬化有一定的辅助治疗作用。从中药蚂蟥的蛋白水解物中，利用离子交换层析和凝胶过滤分子筛层析，能够提取出具有抑制巨噬细胞移动的多肽成分Leech hydrolysate，HE4-1，这可能是蚂蟥具有辅助治疗冠状动脉粥样硬化的有效成分。通过细胞迁移测试，发现纯化后的HE4-1多肽能够抑制巨噬细胞的迁移，并且这种抑制作用的成因可能是HE4-1能够抑制MEKK4和ASK2的转录，以及抑制了MAPK信号通路中JNK和p38蛋白的磷酸化。
实验方法
将干燥的蚂蟥研磨成粉末，取100 g粉末用水溶解，利用Tris-HCl缓冲液调节至pH值8.5，然后用粗酶混合物(含蛋白酶，脂酶，淀粉酶、胰蛋白酶)进行酶解，水解产物用95%乙醇混合后在4摄氏度孵育12 h，粗提物进行真空过滤，旋转蒸发和冻干，得到蚂蟥水解物的制备。
水解物用纯水溶解后先进行Q柱的离子交换初纯，利用纯水当作结合液，对层析柱平衡后，样品进入层析柱，利用2 M NaCl进行线性梯度洗脱(0-45%B共15CV)，用210nm检测，共分离出6个组分HE1-HE6，其中第四个组分HE4具有活性。
接着样品用Superdex 30 16/600进行分子筛精纯，缓冲液为：0.15 M NaCl，流速1 mL/min，共分出两个组分，其中第一个组分为具有活性多肽HE4-1在约40 ml体积流出。
然后样品用Superdex peptide 10/300分子筛精纯，缓冲液为0.15 M NaCl，流速0.5 mL/min，活性多肽HE4-1约在15 ml体积流出。
最后纯化的HE4-1多肽样品在鉴定其序列等生化性质之前，经过Sephadex G10进行换液除盐。
后续经过质谱鉴定，HE是一个约1.4 kda的多肽，序列也同时被测序，纯度约为98%。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28936541 | HiPrep DEAE FF 16/10 | 1 × 20 mL |
| 填料 | 17070910 | DEAE Sepharose FF | 25 mL |
| 预装柱 | 28989331 | HiLoad 16/600 Superdex 30 pg | 1 × 120 mL |
| 预装柱 | 29219757 | Superdex 30 Increase 10/300 GL | 1 × 24 mL |
| 填料 | 17001001 | Sephadex G-10 | 100 g |
