作者：Hao Peng et al.
发表日期：2009年7月
发表期刊：Peptides
研究背景
通过DEAE 离子交换和S-100 凝胶过滤分子筛层析共两步层析，可以从铁线莲属晚花绣球藤Clematis montana中提取凝集素蛋白Clematis montana lectin，CML。CML对寡甘露糖类具有亲和力，具有抗病毒，对一些癌细胞具有明显的抑制生长作用，并促进癌细胞的细胞凋亡，这些作用依赖甘露糖结合能力。通过MTT细胞增殖实现发现，加入纯化后的CML能够抑制HeLa、MCF-7等一些肿瘤细胞的生长，此外CML同时能够通过caspase 3和8信号通路诱导细胞凋亡。利用纯化后的CML蛋白通过体外的亲和力测定，发现CML对mannotriose（甘露三糖）具有明显的结合能力，加入甘露三糖之后，CML的诱导细胞凋亡的能力受到限制，说明CML的诱导细胞凋亡的能力与多糖结合能力有关。
实验方法
将晒干的铁线莲 Akebia Clematis的茎被粉末化后，用40 mM，NaAc-HAc buffer (pH = 4.6)在4度溶解过夜，20000 g离心15 min后，得到铁线莲粗提液。
粗提液先过DEAE Sepharose层析柱1.6 cm × 20 cm，结合缓冲液为40 mM NaAc–HAc buffer (pH = 4.6)，0—0.3 M NaCl 梯度洗脱，流速1 mL/min。CML样品在约0.18 M NaCl浓度下洗脱下来。
DEAE离子交换的洗脱样品再经过分子筛进行精纯，分子筛选择Sephacryl S-100分子筛(2 cm × 75 cm)，缓冲液为20 mM PBS，pH = 7.0。CML样品在约210 mL洗脱出来。
经过鉴定CML蛋白分子量约为11.97 kD，天然状态下形成二聚体形式。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28936541 | HiPrep DEAE FF 16/10 | 1 × 20 mL |
| 填料 | 17070910 | DEAE Sepharose FF | 25 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
| 预装柱 | 17119401 | HiPrep 26/60 Sephacryl S-100 HR | 1 × 320 mL |
| 填料 | 17061210 | Sephacryl S-100 HR | 150 mL |
