作者：YANG Ye et al.
发表日期：2014年5月
发表期刊：华西药学杂志
研究背景
天花粉蛋白trichosanthin，TCS是从中药天花粉中提取的植物蛋白。曾经是用于计划生育和治疗宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎的良药。科学家又发现天花粉蛋白能抑制HIV的复制和繁殖。通过亲和和离子交换两步层析配合传统的硫酸铵沉淀方法能够从栝楼块茎Trichosanthes kirilowii中直接提取出天花粉蛋白TCS。将纯化后的天花粉蛋白TCS进行抗肿瘤活性检测：在培养的Hela细胞加入TCS给药后， 检测细胞增殖速度，发现TCS具有抑制肿瘤细胞生长的作用。
实验方法
将100 g的栝楼块茎，粉碎机粉碎后，0.25 mm筛网过滤，过滤后的粉末用400 mL的150 mM NaCl溶解搅拌过夜，然后经过过滤和1000 rmp离心10 min，上清液用500 mM醋酸pH = 2调节至pH = 3，经过1000 rmp离心10 min，上清液用500 mM磷酸缓冲液pH = 7调节到pH = 6.5，制备出TCS粗提液。
粗提液再进行30%—85%硫酸铵分级沉淀，将85%沉淀组分溶解于25 mM磷酸缓冲液pH = 6.5中，后经25 mM磷酸缓冲液pH = 6.5透析除盐换液离心取上清。
上清液再用Blue层析填料初纯，层析柱装填Blue填料成1.3 × 2.5 cm柱，流速2 mL/min，结合缓冲液为25 mM磷酸缓冲液pH = 6.5。洗脱缓冲液为25 mM磷酸缓冲液pH = 6.5，150 mM NaCl。
Blue层析填料洗脱下来的样品再经SP离子交换层析精纯，SP -FF装填成40 mL柱体积，结合和洗杂缓冲液：25 mM磷酸缓冲液pH 6.5，流速2 mL/min，洗脱缓冲液为25 mM磷酸缓冲液pH = 6.5，100 mM NaCl线性梯度洗脱。
最终得到天花粉蛋白TCS约86 mg，经过检测分子量约27 kDa。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 28992474 | HiScreen Capto Blue | 1 × 4.7 mL |
| 填料 | 17544801 | Capto Blue | 25 mL |
| 预装柱 | 28936544 | HiPrep SP FF 16/10 | 1 × 20 ml |
| 填料 | 17072910 | SP Sepharose FF | 25 mL |
Reference
杨烨,范翔,李刚锐,等. 天花粉蛋白的制备及其性质[J]. 华西药学杂志,2014,29(5):510-512. DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2014.05.008.
