作者：Rau l G. Saraiva., et al.
发表日期：2018年04月
发表期刊：PLOS Neglected Tropical Diseases
研究背景
登革热病毒(DENV)是由伊蚊传播的最流行和最繁重的虫媒病毒，针对这种病毒只有有限的许可疫苗和没有批准的药物治疗。从埃及伊蚊中肠分离出的一种显色细菌巴拿马C. sp.能够抑制登革热病毒在蚊子体内和体外的复制。研究发现巴拿马C.sp.通过分泌因子介导其抗DENV活性，这些因子本质上是蛋白质。这种抑制作用发生在病毒附着于细胞之前，并归因于一种通过促进病毒包膜蛋白降解而破坏病毒粒子稳定性的因素。
生物测定引导分离，结合质谱鉴定出巴拿马C. sp.分泌的中性蛋白酶和氨基肽酶，它们是共表达的协同作用，降解病毒包膜(E)蛋白，从而防止病毒附着和随后的细胞感染。这是首次研究一种常见的土壤和蚊子相关细菌的抗登革热病毒活性，从而有助于了解这种细菌如何限制疾病传播，并为登革热预防和治疗提供新的工具。
实验方法
病毒获取与巴拿马C.sp.来源蛋白酶纯化具体方法如下：
- 细胞培养以扩增DENV2病毒，测定病毒的滴度。
- 培养巴拿马色杆菌，收获培养上清，使用丁醇、氯仿等有机溶剂萃取分泌蛋白并硫酸铵沉淀。
- 重悬沉淀蛋白于 0.1MTris-HCl pH 7.2溶液中，使用ÄKTA层析设备进行纯化。用HiTrap Butyl FF疏水层析柱进行粗纯。纯化流速为1mL /min，在50 mM pH7.0 磷酸钠溶液中，从1.5 M到0 M硫酸铵进行梯度洗脱，在214 nm处检测吸光度。
- 收集组分并用HiTrap Butyl HP 疏水层析柱进一步精纯，条件基本同上。
- 使用30 kDa超滤管浓缩收集组分，并进行蛋白组学分析和后续活性测试。
推荐产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 17519701 | HiTrap Butyl FF | 5 × 5 mL |
| 预装柱 | 28411005 | HiTrap Butyl HP | 5 × 5 mL |
