作者：Bian, H. et al.
发表日期：2021年11月
发表期刊：Pathogens

研究背景

猪圆环病毒2 型 (PCV2)是一种没有包膜的 DNA 病毒。病毒颗粒为二十面体，直径约为17 nm。为了获得纯化的病毒，将针对PCV2的广谱单克隆抗体3A5与CNBr激活的Sepharose 4B偶联，并建立亲和层析用于PCV2纯化。从120 mL病毒培养基中共获得6.5 mg纯化的PCV2a/LG，纯度为97%，电镜仅检测到PCV2。通过捕获酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测到纯化病毒的抗原特征没有显着变化。结果表明，纯化的病毒可用于使用间接免疫荧光测定研究病毒吸附和PK15细胞的侵袭。PCV2被PK15细胞吸附30分钟后，检测到大量PCV2信号从细胞表面转移到PK15细胞核周围。亲和层析是获得高纯度PCV2的一种简单方便的工具。可用于病毒结构分析、抗体制备、病毒吸附和入侵研究。

实验方法

预先使用Protein G Sepharose CL 4B (Cytiva)填料纯化mAb 3A5。然后按照使用说明将20 mg的抗体偶联到CNBr-activated Sepharose 4B (Cytiva)填料上。偶联完成后，把PCV2病毒样品与填料混合，4℃下过夜震荡孵育。把填料装填在重力柱中，使用washing buffer (20 mM NaHPO4, 0.5 M NaCl, pH7.4)洗20个柱体积以去除未结合的蛋白。再使用elution buffer (0.1 M glycine-HCl, pH3.0) 将PCV2蛋白洗脱下来。

产品信息

Reference
Bian H, Yu C, Wei Y, Feng L, Liu C, Huang L. Purification of Porcine Circovirus Type 2 Using an Affinity Chromatography Based on a Neutralizing Monoclonal Antibody against Viral Capsid Protein. Pathogens. 2021 Nov 30;10(12):1564.