作者：Lin Zeng et al.
发表日期：Jan 2021
发表期刊：Protein Expression and Purification

研究背景

在蜈蚣直接叮咬和临床使用含有蜈蚣的药物后，都观察到了过敏反应。如中药使用的蜈蚣；然而，目前还没有天然蜈蚣过敏原的特征。

目前，一些疑似蜈蚣过敏原的核苷酸序列可以在NCBI数据库中找到，但尚未对天然蜈蚣过敏源进行纯化和鉴定。我们之前的转录组分析从Scolopendra subspinipes mutilans中鉴定了五种毒液过敏原样蛋白，但根据少棘蜈蚣蛋白质组数据与其他节肢动物物种已知过敏原的序列相似性比较，只能鉴定出其中一种过敏原样蛋白质。

研究方法

购自中国湖北省随州县。如前所述进行毒液收集。用2ml 20mM TriseHCl缓冲液溶解冻干的粗毒液粉末（500mg）；将混合物以12000rpm离心10分钟后，将所得上清液装载到Superdex 75柱（GE Healthcare，USA）上。用相同的缓冲液对柱进行预平衡，并以1.5ml/min的流速洗脱。收集来自凝胶过滤的峰V，并用20mM磷酸盐缓冲液（NaH2PO4，Na2HPO4，pH 6.5）透析，然后在RESOURCE S柱（1ml，GE Healthcare）上进一步纯化。该柱用相同的磷酸盐缓冲液预平衡，并用含有1M NaCl的20mM磷酸盐缓冲液以1ml/min的流速洗脱。Superdex 75和RESOURCE S柱均连接到快速蛋白质液相色谱（FPLC）系统（AKTA Pure，GE Healthcare）。通过FPLC系统在280nm的波长下监测洗脱。每个纯化步骤都通过致敏性评估分析（免疫印迹）进行监测，并储存所得纯化的过敏原在-20℃下使用。如前所述，对纯化的过敏原进行质谱生成和N末端测序。在UV 280nm通过在线性模式下使用MALDI-TOF/TOF（Autoflex speed TOF/TOF，Bruker，Germany）获得肽片段。N末端序列通过蛋白质测序仪（PPSQ 31A，Shimadzu，Japan）测定，分子量通过LC-MS-MS（Exactive Plus，ThermoFisher Scientific，USA）测定。

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Reference
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1323893020300927?via%3Dihub