作者：Ling Qin et al.
发表日期：2022年4月
发表期刊：Marine Drugs
研究背景
硫酸化多糖不仅是细胞壁的重要组成部分，也是一种具有多种生物活性的重要成分。目前，硫酸化多糖作为营养成分或治疗剂被广泛应用于食品和制药行业。海藻，含有丰富的营养物质和生物活性物质。海藻中的多糖则具有抗肿瘤、免疫调节、抗凝血、抗氧化、抗炎等多种生物学活性。褐藻多糖几乎没有副作用，在此前的文献中已被证明是潜在的海洋天然候选药物。本工作从褐藻D. Antarctica中分离、纯化得到褐藻多糖，并通过甲基化分析和核磁共振光谱分析确定了其结构特征，即褐藻多糖是一种硫酸化多糖，主要由岩藻糖和硫酸基团组成。同时评估了其潜在的体外免疫调节活性：包括淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬、NO产生和NK细胞体外细胞毒性。
实验方法
将500 g的褐藻粉末用95%乙醇以1:5 (w/v)的比例脱脂。然后将褐藻粉末用5 L蒸馏水在70°C下提取3小时，提取物以5000 rpm的转速离心10分钟。此步骤重复3次。合并上清液后进行减压浓缩；接下来，将上清液用纤维素膜 (截留分子量3.5 kDa)在室温下用蒸馏水透析。回收部分用95%乙醇沉淀，使乙醇终浓度为75%。得到的沉淀物用100%乙醇和丙酮洗涤以去除多余的水分，然后将得到的粗多糖在40°C下干燥。最后将干燥的多糖溶解在蒸馏水中并与3 M CaCl2混合，以5000 rpm的速度离心10分钟，取上清液冻干，即获得了粗制的褐藻多糖命名为DAP。
粗制褐藻多糖DAP接下来通过Q Sepharose Fast Flow 层析柱 (30 cm × 3.5 cm)进行第一阶段的纯化，用逐步梯度增加的NaCl溶液 (0、0.5、1.0 和 1.5 M)进行洗脱。收集用1.5 M NaCl洗脱的级分，接下来在Sephacryl S-300 HR层析柱 (100 cm × 2.5 cm)上进一步纯化。用0.2 M NH4HCO3洗脱，将洗脱液中主要的多糖组分合并、脱盐、冷冻干燥并命名为褐藻多糖DAP4。
随后对收集得到的样品褐藻多糖DAP4进行单糖组成测定，分子量测定，甲基化分析及核磁解析等，揭示DAP4的多糖结构。同时对DAP4多糖组分进行了一系列免疫调节活性的研究。
产品信息
| 类别 | 货号 | 产品名称 | 规格 |
|---|---|---|---|
| 预装柱 | 11001303 | HiTrap Capto Q | 5 x 5 mL |
| 填料 | 17051010 | Q Sepharose Fast Flow | 25 mL |
| 填料 | 17531610 | Capto Q | 25 mL |
| 填料 | 17059910 | Sephacryl S-300 HR | 150 mL |
| 空柱 | 28988937 | Column XK 16/20 | 16/20 |
