客户反馈

西泽友弘博士 @东京大学大学院理学研究科生物科学系 Nureki 实验室

现在,我可以处理更多样本,进而获得更高的通量。以前蛋白质纯化需要一小时,现在只需要 30 分钟

西泽友弘博士经常纯化膜蛋白以用于结晶,我们询问了他对于新型 Superose 6 Increase 体积排阻色谱柱的看法。他表示,与标准的 Superose 6 层析柱相比,新型 Superose 6 Increase 的纯化时间更短、通量更高,这一点令他很满意。

纯化时间曾一度成为我的瓶颈。

使用 Superose 6 层析柱也可以对膜蛋白样本进行分离。但主要的问题是其通量较低。例如,纯化一个样本通常需要一个小时。然后是几个小时的准备工作和清理时间。如此一来便很难在一天之内纯化多个样本。

我们听说,新型 Superdex 200 Increase 的分辨率极高,且流速也有所提升。因此,我们试用了该层析柱,看看它是否可以缩短纯化时间。膜蛋白往往会在去垢剂中形成胶束,从而获得更高的分子量。不幸的是,体积变大反而使靶蛋白被排除在 Superdex 200 Increase 的分离范围之外。靶蛋白的峰非常接近外水体积的峰面积,因此无法进行适当的分离。

现在,纯化时间减半

而 Superose 6 Increase 的分离范围恰好适用于分离我需要的膜蛋白胶束。因此,分离进行得十分顺利。更令我满意的是,使用该新型层析柱时,我可以相应提高流速,从而缩短纯化时间。我惊喜地发现,纯化出一种蛋白质之前需要一个小时,而现在只需要 30 分钟。这为我节省了时间,让我不仅可以在一天内纯化三个或四个不同的样本,而且还可以更快地进行突变体筛选并更快获得结果。”

方法纯化系统:ÄKTAexplorer 10S

纯化环境:4°C

样本:昆虫细胞表达系统产生的膜蛋白

缓冲液:10 mM HEPES,150 mM NaCl,去垢剂

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Ciaran McKeown @帝国理工学院医学系

“我们使用 SEC MALS(体积排阻色谱多角光散射)来测定蛋白质和蛋白复合物的绝对分子量。这是一项十分强大的技术,其中的 SEC 部分需要用一个分离效果和分辨率都良好的层析柱进行。我们曾尝试使用该系统自带的层析柱,虽然得出了合理的结果,但其分离范围有限。

我们还尝试了【原有产品】Superose 6 3.2/300,但其流速慢,导致信噪比过高。为了改善分离范围,我们还尝试了硅胶层析柱,但其硅胶构成却也导致了在 pH 范围和缓冲液选择方面有所限制。现在,我们经常使用 Superdex 200 Increase 10/300 和 Superose 6 Increase 来实现此技术。Increase 层析柱具有更好的压力限制、更高的流速,可兼容不同缓冲液,且分辨率良好。

但我们确实也遇到了一些问题,例如当出现高达 1 MDa [Mr 1,000,000] 的超大分子复合物,并且我们的样本出现在外水体积中时。在这种情况下,样本可以在空隙中与聚集体和污染物混合,从而产生不纯的样本用于下游分析。”

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Andreas Lehmann @ Molecular Partners AG

“我们使用 Superdex 200 Increase 5/150 进行筛查。自从改用新一代 Superdex 以来,我们已经分析了 10,000 多个样本。它速度快、一致性高,帮助我们提高了筛查流程的通量,这一点令我十分满意。”

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Ian A Taylor @伦敦弗朗西斯克里克研究所大分子结构实验室

“即使是在两倍流速下,分辨率也优于常规的 Superdex 75 层析柱。随着流速(0.5、0.8 和 1.0 mL/min)的增加,仅观察到峰宽小量增长。总之,新型 [Increase] 10/300 层析柱相对于 Superdex 75 (10/300) 层析柱有显着改进。这意味着完成多角光散射 (MALS) 的时间可以减半,且层析分辨率可以提高。如果使用能够适当管理这些压力的层析系统,则反向压力的增加将不再是大问题。”

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Paul Wan 博士 @英国阿斯利康研发中心,发现科学

“分辨率优于标准 Superdex 75 层析柱。增大流速(0.5、0.75、1.5 mL/min)对层析柱的分辨率无影响。当增大流速(0.5、0.75、1.5 mL/min)时,所获得的分辨率几乎没有损失,这让我感到惊讶。而且相比之前,速度也更快”

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