印迹膜
用于蛋白质印迹和核酸分析的 PVDF 和硝酸纤维素膜
常见问题
“印迹”是指蛋白或核酸转移至微孔滤膜的过程；当研究的分子是蛋白时，该过程称为蛋白质印迹法。蛋白质印迹法有三个主要步骤：分离目标蛋白、转移至膜以及检测与膜结合的蛋白。通过转移至蛋白质印迹膜，可使用不能用于凝胶的分子探针检测蛋白。阅读我们的 7 步蛋白质印迹法指南，了解更多有关该过程的信息。
在生命科学研究、生物制造和临床诊断中，蛋白质印迹法广泛用于检测是否存在蛋白或蛋白修饰。
分离蛋白
分离蛋白通过丙烯酰胺凝胶/聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行。在此过程中，将蛋白样本上样至凝胶上的样本孔中，然后对其施加电流。电流推动蛋白质以不同的速率穿过凝胶孔，这取决于蛋白大小、形状或电荷。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native PAGE）根据电荷分离蛋白，而SDS-PAGE 中添加了去垢剂 SDS ，消除了电荷对于蛋白质迁移率的影响，从而根据分子大小分离蛋白。
由于SDS-PAGE 具有高分辨率和免疫分析的高灵敏度，因此蛋白质印迹技术可检测低分子量蛋白。
蛋白转移
将蛋白转移至膜，这比在凝胶中检测蛋白的方法更具灵活性，且有更多分析机会。与凝胶相比，蛋白质印迹膜提供更好的分子探针可及性、更强的耐用性且更易于处理，另外还可剥离和重新标记膜以对相同蛋白分离进行多次分析。电转移是最常见的电泳后蛋白转移方法。
蛋白质印迹膜
适用于 Western 印迹技术的膜特性包括：
- 高结合能力
- 较大的表面积/体积比
- 大分子长期储存
聚偏二氟乙烯 (PVDF) 和硝酸纤维素是蛋白质印迹膜的最常见材料。这些膜以不同厚度和孔径的片装或卷装形式提供。常见孔径为 0.45 μm、0.2 μm 和 0.1 μm。
硝酸纤维素膜
硝酸纤维素蛋白质印迹膜可兼容多种检测方法，对蛋白有很强的结合能力。这些膜可提供较高效率，但不能像 PVDF 膜一样可以多次剥离和重新标记。
PVDF 膜
PVDF 膜具有高度疏水性，对核酸和蛋白具有较高的结合力。浸入转膜缓冲液或试剂前，必须使用乙醇或甲醇预润湿。PVDF 支持多次剥离和重新标记。
蛋白质印迹膜常见问题解答
以下是一些关于蛋白质印迹膜的一些常见问题：
蛋白质印迹膜有什么功能？
蛋白质印迹膜可固定蛋白以提高可处理性。
蛋白质印迹膜有哪些不同类型？
蛋白质印迹技术中最常见的膜是 PVDF 和硝酸纤维素膜。尼龙膜可以结合蛋白，但它们主要用于核酸印迹法，原因是它们显示出高度的非特异性结合并可与蛋白检测中常用的染色剂结合。