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哺乳动物细胞抗生素筛选

选择性抗生素也称为筛选抗生素,用于分离和建立转基因细胞或转染细胞来产生稳定细胞系。在筛选转染细胞时,既可以将筛选标记添加到出现基因改变的核酸序列中,也可以共转染到一个单独的质粒中。只有含有带筛选标记 DNA 的细胞才会在有选择性抗生素或试剂的环境中生长。

选择经过基因工程改造的细胞时,应选择与筛选标记匹配的筛选抗生素或试剂。常用选项包括:

  • G418(遗传霉素):一种转染哺乳动物、酵母、植物和细菌细胞的试剂。
  • 嘌呤霉素:一种 pac 基因筛选抗生素,广泛适用于真核生物和原核生物。
  • 潮霉素 B:一种抑制易位的 hph 基因筛选抗生素。


转化细菌细胞的筛选

在典型的实验中,递送到细胞的质粒 DNA 同时包含一个抗生素抗性基因和目的基因。氨苄青霉素是一种常见的筛选抗生素,用于筛选成功转染的细胞。

细胞培养的污染问题

在科研或生物制造中进行细胞培养时面临的一项主要挑战是培养基被外来物质污染。细胞培养的污染物可分为两大类:

  • 化学污染物:通常是细胞培养基血清或水中的内毒素、增塑剂和去污剂等杂质。
  • 生物污染物:细菌、真菌、病毒和支原体等活的微生物。这些污染物可能因试剂未消毒或处理时未采用无菌技术而进入培养物。


污染物通常会显著影响细胞培养物的健康状况。它们还给生物制造带来了挑战,因此确保最终产品不包含不需要的化学或生物物质至关重要。

由细菌、霉菌和酵母菌引起的生物污染

细菌、霉菌和酵母菌在我们的自然环境中几乎无处不在,它们在营养丰富的细胞培养基中能够快速定殖和增殖。这些微生物的直径通常只有几微米,形状各异,例如呈棒状和球状。它们的大小和快速生长速度使得它们成为体外细胞培养最常见的污染物。

微生物污染物检测

由于会迅速出现混浊,用肉眼就可以发现微生物病原体污染。细菌污染也会引起 pH 值变化。如果细胞在含有酚红指示剂的细胞培养基中生长,那么颜色迅速变黄就表示受到污染,这也简化了污染物检测。通过标准光学显微镜,您可轻松识别真菌细胞和细菌结构,例如大肠杆菌菌株。

使用抗生素防止污染

抗生素是靶向杀死特定病原类型(细菌,真菌和其他微生物)的药剂。它们要么诱导死亡,要么充当生长抑制剂,这有助于减少有价值的细胞和试剂的损失。抑菌解决方案包括庆大霉素青霉素-链霉素或青霉素-链霉素-谷氨酰胺,它们也作用于分枝杆菌。其他筛选抗生素有助于防止真菌、霉菌和酵母菌污染。