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体外培养细胞时,需要维持最佳条件以确保达到细胞增殖峰值。虽然适用于各细胞类型的这些条件不同,但基本培养条件包括受控温度、适当的生长培养基、生长因子、气体(如二氧化碳和氧气)和适当的容器。培养系统中使用的细胞大致可分为贴壁细胞和非贴壁细胞。因为贴壁细胞具有贴壁依赖性,所以它们通常需要组织培养物表面或微载体等附着基质。然而,非贴壁细胞可在适于进行悬浮细胞培养的适当培养基中自由漂浮生长。

贴壁和悬浮细胞培养物的特性

大多数源自脊椎动物来源的细胞需要合适的基质才能进行细胞贴附和扩散。然而,有时可以使贴壁细胞在悬浮状态下生长。许多细胞系(如昆虫细胞系)都支持悬浮培养。

解离试剂 悬浮细胞培养
适用于大多数细胞类型和原代培养物 用于非贴壁细胞系和适于悬浮培养的细胞
可在倒置显微镜下轻松查看 易于传代
需要通过机械方式或解离试剂(如猪胰蛋白酶ADCF 重组胰蛋白酶)对细胞进行解离 不需要细胞解离
表面积限制生长和产物收率 细胞被培养基包围,培养基为获得更高的细胞密度和产物收率提供支持
常见的应用包括细胞学、研究和生物制品生产(无法提供非贴壁细胞时) 在生物反应器(用于生物生产)和旋转培养瓶(用于研究)中培养

细胞解离

为了在贴壁细胞(例如上皮细胞)的自然环境外部对其进行培养,可以将其接种至经组织培养物处理的表面或微载体上。然后这些细胞会在生长和增殖时附着于该表面并彼此附着。在贴壁细胞准备好进行传代培养或用于大多数后续分析之前,通过细胞解离缓冲液和试剂或其他方法将它们从生长表面释放。使用细胞解离试剂可以获得单细胞悬液,以用于细胞计数、重新接种继代培养物和细胞分析。

解离的类型

以下是使用解离试剂和其他方式释放贴壁细胞的方法:

  • 机械解离:此过程使用物理方法使细胞脱离,是解离温和度最低的选择。研究中通常会使用细胞刮棒。
  • 酶解解离:酶解解离使用特定蛋白质和缓冲解离试剂 - 蛋白酶或其他酶(如胶原酶)- 破坏附着表面与细胞之间的附着。
  • 化学解离:这种非酶解法涉及使用乙二醇四乙酸 (EGTA) 等化合物,这些化合物可以结合细胞附着所需的钙离子。

使细胞胰蛋白酶化需要多长时间?

一定要查看您使用的解离试剂的生产商说明,并且请注意,不同细胞系可能需要不同的条件。一般情况下,要从组织培养表面取出细胞,需要以无菌方式取出培养基,然后加入预热猪或重组胰蛋白酶。在 37°C 下孵育培养容器 2 至 3 分钟,然后在显微镜下进行检查。如果脱附的细胞少于 90%,则再孵育 2 分钟,同时在显微镜下以 30 秒的时间间隔进行观察。避免长期暴露于胰蛋白酶,不要超过 15 分钟。最后,用血清或 ADCF 胰酶中和试剂中和胰蛋白酶。