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为什么要进行细胞分离

细胞分离是指从多种细胞混合悬液中分离出一种或多种特定活细胞群的过程。通过进行细胞分离这一实验操作,研究人员可以深入了解某类细胞的特征。在细胞治疗行业,往往需要从外周血或其他来源的生物样本中分离出特定的细胞类型,然后进行细胞扩增以获取足够数目的细胞。细胞分离的常见应用包括:

  • 进行单细胞分子分析,例如评估RNA表达水平
  • 实现特定细胞类型的基因修饰,如嵌合抗原受体 (CAR T) 细胞疗法
  • 在不同动物模型中进行过继细胞转移实验
  • 提高HLA和FISH分析等分析技术的灵敏度

细胞分离技术

可使用多种方法从复杂的生物样品中分离细胞。不同的细胞特征(如密度、大小、形态和生理学)决定了要使用的分离方法和试剂。细胞分离技术分为以下几大种类:

  • 密度梯度离心技术:依赖于异质样本的不同细胞密度。
  • 免疫磁性细胞分离技术:利用对特定细胞表面标志物具有亲和力的磁性颗粒从异质混合物中分离靶细胞。
  • 荧光激活细胞分选 (FACS)技术:该技术使用针对特定细胞表面标志物的荧光探针和流式细胞仪来分离复杂的细胞混合物。
  • 免疫密度细胞分离技术:这种阴性选择方法利用基于抗体的标记和密度梯度离心去除不需要的细胞类型,如红细胞。
  • 沉淀分离技术:重力会导致密度较大的成分快速沉淀,以便于分离。上清液经过连续离心以分离细胞。

密度梯度离心常见问题

以下是有关密度梯度离心的常见问题解答。

什么是密度梯度离心?

密度梯度离心法是一种用于分离不同细胞类型、悬浮颗粒(如病毒)或分子(如 DNA)的方法,它使用特定密度或不同密度梯度的介质,密度最高的介质位于底部。分析离心可用于确定混合物中不同粒子的密度。

密度梯度离心有何用途?

密度梯度离心常用于从动物、植物或微生物来源的样本中分离细胞。该方法用于生产包括CAR T和自然杀伤细胞(NK 细胞)在内的细胞治疗产品。

在这些应用中,需要使用无菌且内毒素含量低的分离液来进行白细胞与外周血、骨髓或脐带血中的其他成分分离。目前,最常使用的密度梯度分离液是密度为 1.077g/mL 的聚蔗糖溶液。如果需要分离具有特定细胞表面标志物的细胞,可以将密度梯度离心与其他分离方法结合使用。