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蛋白纯化是从细胞和组织等复杂混合物中分离一种或多种天然或重组蛋白的一系列过程。蛋白的纯化有助于表征不同蛋白的结构和功能,并且可用于生产治疗药物。这些过程通过利用不同的物理化学特性,如形状、大小、离子电荷、特异性结合和疏水基团相互作用等得以实现。蛋白纯化分为分析级蛋白纯化和制备级蛋白纯化。分析级的纯化产生适量的分离物用于研究,而制备级的纯化产生大量纯化的蛋白,通常用作生物制品。

利用亲和层析进行蛋白纯化

您可以通过多种方法从复杂混合物和粗提物中纯化蛋白和其他大分子。一种方法是亲和层析,它根据特定的大分子结合相互作用将生物分子从混合物中分离出来。

用于蛋白纯化的亲和层析利用的是目标蛋白和配基之间的结合相互作用。该方法具有高度的选择性和分辨率。在亲和层析过程中,重组蛋白混合物通过层析柱,层析柱包含带有螯合配基的填料。配基选择性地结合对配基具有高亲和力的蛋白。用缓冲液洗掉许多污染物,然后用洗脱缓冲液以高纯度洗脱结合蛋白。

亲和层析纯化常见问题解答

以下是有关利用亲和层析进行蛋白纯化和其他分子纯化的一些常见问题的解答。

什么是亲和层析?

亲和层析是一种分离技术,利用了螯合配基与其结合物质之间的特定结合相互作用。这通常是实现高纯度的纯化方案的第一步。

亲和层析有哪些用途?

亲和层析被广泛应用于各种领域,例如单克隆抗体 (mAb) 纯化、其他蛋白的纯化和核酸纯化。这种分离技术也可用于病毒载体的纯化,例如用于基因治疗的腺相关病毒 (AAV)。AAV 有多种血清型,可以针对不同类型的组织;不同的血清型对特定配基的亲和力可能不同。您还可以将亲和纯化用于质粒的下游工艺。其他可以使用亲和方法纯化的分子包括白蛋白、酶、糖蛋白、多糖和糖脂。

如何使用亲和层析纯化蛋白?

利用亲和层析进行蛋白纯化依赖于蛋白与特定配基之间的相互作用。该过程利用与固定相中配基的结合相互作用差异分离溶液中的分子。目标蛋白对配基的亲和力很高,而其他分子则是非特异性结合或根本不结合。蛋白与附着在基质上的配基的结合可以通过竞争作用或使用 pH 值和离子强度降低亲和力来实现逆转。

如何找到适合纯化我的分子类型的亲和填料?

如果您的蛋白是单克隆抗体,通常使用蛋白质 A 填料。根据分子或片段的特征,也可以使用其他的亲和配基。如果您的分子是重组蛋白,并且您在其上设计了亲和标签,例如多组氨酸或谷胱甘肽 S-转移酶 (GST),可以使用标签蛋白质亲和填料进行纯化。如果是其他蛋白和其他类型的分子,则可以有很多选择。Cytiva 的 Purify 应用程序将指导您完成确定合适填料的过程。